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细胞培养中培养基你还困惑吗?注意这些就够了!

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发表时间:2021-11-11 11:09作者:诺扬生物


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细胞培养基是细胞培养中不可缺少的营养成分,但是最基础的培养基却给很多实验者带来了一系列的问题。如果细胞状态不好,后续试验将无法进行,甚至前功尽弃。

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   培养基常见问题   


一、如何选用培养基?   选择培养基没有一定标准,有几点建议可供参考:

1. 建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基。可以查阅文献,或在购买细胞株时咨询。

2. 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选1640;进行细胞杂交、基因转移实验,可选择IMDM。

3. 用多种培养基培养目的细胞,观察其生长状态,可以用生长曲线、集落形成率等指标判断,根据实验结果选择最佳培养基,这是最客观的方法,但比较繁琐。

4.ATCC(American Type Culture Collection)收集了绝大多数细胞的详细资料。打开ATCC网页的Cells and hybridomas链接,输入细胞名称就可以搜索ATCC的细胞数据库。数据库中有每一种细胞的详细描述,包括细胞的来源,培养和冻存条件,以及相关文献等资料。


二、液体培养基可以放-20℃保存吗?

不可以!因为在-20℃下,培养基中的盐容易析出,培养基融化后,有的盐可能无法重新溶解,从而导致培养基渗透压降低,培养细胞时,细胞容易破裂而死亡。   


三、新配制的液体培养基能保存多久?

我们建议将新配制的培养基放置于4℃,避光保存尽量在一周内使用完毕。培养基越新鲜越好。


四、培养基中添加了血清和抗生素后,可长期保存吗?

一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。


五、培养基中是否须添加抗生素?

除了特殊筛选系统外,一般正常培养状态下,培养基中不应添加任何抗生素。

为防止细菌、真菌污染,可以加入青霉素-链霉素双抗溶液,其培养基中的终浓度为青霉素100U/ml,链霉素为100ug/ml。   


六、为何培养基保存于4℃冰箱中,颜色会偏暗红色,且pH值越来越偏碱性?

培养基保存于4℃冰箱中, 培养基内之CO2 会逐渐溢出,造成培养基越来越偏碱性。而培养基中之酸碱指示剂(通常为phenol red)的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果, 将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时, 可以通入无菌过滤之CO2, 以调整pH 值。


七、培养液pH是怎样影响细胞生长的?

由于大多数细胞适宜PH值为7.2-7.4,偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对PH值要求也不完全相同,原代细胞培养一般对PH值变动耐受差,无限细胞系耐受力强。 但总体来说,细胞耐酸性比耐碱性强一些,偏酸环境中更有利于细胞的生长。因此,配制培养用液时可把液体的PH值稍微调的偏酸一些。液体在经过0.1um或0.2um滤膜过滤时,PH值会向上浮动0.2左右。


八、为什么液体培养基1640颜色发黄,是pH值不对吗?

不是。因为配方原因,1640为碱酚红型,其中酚红的浓度只有DMEM的四分之一,所以是因为酚红浓度低,而非PH值低。


九、为什么有客户要求培养基中不含酚红?

研究表明,酚红可以模拟固醇类激素的作用(特别是雌激素)。为避免固醇类反应,细胞培养,尤其是哺乳类细胞时,用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时,不使用加酚红的培养基。


十、放置在冰箱中的培养基颜色会发生变化,为什么?

培养基保存于4℃冰箱中,培养基内CO2会逐渐溢出,造成培养基越来越偏碱性。而培养基中酸碱指示剂(通常为phenol red)的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱后再用于细胞培养将造成细胞生长停滞或死亡。培养基偏碱时,可以通入无菌过滤的CO2,以调整pH值。


十一、无血清培养与有血清培养使用的抗生素量一样吗?

当在无血清培养基中添加抗生素时,降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。因为血清中的蛋白会结合和灭活一些抗生素。而在无血清培养条件下,抗生素不被灭活。


十二、培养基各个成分的作用有哪些?

1.NaHCO3的作用是什么?

与二氧化碳一起形成缓冲系统,保持培养基PH值稳定。

2.丙酮酸钠的作用是什么?

丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源,尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源,但是如果没有葡萄糖的话,细胞也可以代谢丙酮酸钠。丙酮酸钠的贮存液浓度一般为50mM,-20℃保存,培养基中的终浓度为1mM.

3.加入HEPES有何好处?

培养基中最常用的Buffer system是碳酸氢盐,它可提供营养,但却在生理PH值条件下会降低缓冲能力。而HEPES是一种很强的Buffer,加入HEPES能使细胞培养基在PH7.2-7.6条件下缓冲能力增强。HEPES的贮存液浓度一般为1M,常温保存。培养基中的终浓度为25mM,即5ml 1M的HEPES加入到200ml完全培养基中。

4.酚红的作用是什么?

酚红在培养基中被用来作为PH值指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。

5.谷氨酰胺的作用是什么?

几乎所有的细胞对谷氨酰胺都有较高的要求。谷氨酰胺脱掉氨基后,可作为培养细胞的能量来源,参与蛋白质的合成和能量代谢。在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡。所以,各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。

谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置-20℃冰冻保存,用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4度冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。

试验操作中常配制高浓度(100倍)的谷氨酰胺溶液(1ml/支),分装使用,-20℃保存。使用时,每支1ml的谷氨酰胺加入到99ml完全培养基中,使其终浓度为2mM培养基。


   赛澳美简介   

赛澳美细胞技术(北京)有限公司作为生命科学领域专业系统供应商,致力于为干细胞、免疫细胞治疗、疫苗、抗体蛋白及动物细胞工程等基础及应用领域提供一体化解决方案。主要产品为胎牛血清、细胞培养基、胰酶、单抗等全套细胞培养基质材料。


CellMax能够提供多种基础培养基的液体和干粉剂型,并且可根据客户需要提供各种产品的定制化服务。液体可提供500ml和1000ml两种规格。




CellMax可以提供11种基础培养基的液体和干粉剂型



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可提供定制服务




无论何种行业,高端定制一直是趋势。定制产品能让您精准科研,稳定高效并且更多的节省科研时间

您是否有自己的配方而又想要避免亲自制备的麻烦呢?无论您需要10升或者10,000升,我们都将以最高质量标准生产您的配方产品。

将您的配方连同您需要的体积、包装、检测以及其他更多信息提供给我们,我们来完成剩下的工作。



CellMax定制化服务内容




每一种细胞的培养方案都有其特殊性,赛澳美致力于提供 最适合客户的实验和生产需求的定制产品和服务。

ü CellMax具有国内领先的产能,拥有自己的高端塑料容器生产厂。

ü 可以按照客户要求,调整培养基配方,添加特殊组分。

ü 可以根据客户需求,稳定供应不同规格包装的培养及产品。




基础培养基应用




细胞培养基是人工模拟细胞在体内生长的营养环境,是提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。

被广泛应用于细胞生物学科和医学研究的各个领域,如疫苗生产、基因药物生产、临床用单抗等。


DMEM细胞培养基

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DMEM是由Dulbecco改良的Eagle培养基,起初是为小鼠成纤维细胞设计的。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍,维生素浓度是MEM的4倍,采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。


低糖适于依赖性贴壁细胞培养,特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。高糖更适合高密度悬浮细胞培养,也适用于附着性较差,但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养,也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。例如CHO细胞表达生产乙肝疫苗、CHO细胞表达EPO。


RPMI-1640细胞培养基


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Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制,针对淋巴细胞培养设计,含BSS+21种氨基酸+维生素11种等。现也用于悬浮细胞培养,如哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞,杂交瘤细胞的培养,其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。




DMEM/F12细胞培养基



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Ham's F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的,现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM等体积混合使用,得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物,这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。由于营养成分丰富,且可以使用较少血清,故也常作为无血清培养基的基础培养基。



M199细胞培养基


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1950年Morgan等设计的具有确定化学成分的细胞培养液,即M-199。除BSS外,含有53种成分,为全面培养基,主要用于鸡胚成纤维细胞培养。此培养液必须辅以血清才能支持长期培养。M-199可用于培养多种种属来源的细胞,并能培养转染的细胞。现广泛用于病毒学、疫苗生产。


END



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