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浅谈基础培养基的几种重要组分!

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发表时间:2021-10-12 16:15

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前言

细胞培养市场上有不同品牌,不同种类的基础培养基,但是其配方都是大同小异,都含有几种相同的重要组分,那么我们逐一说明。


1、葡萄糖

•葡萄糖浓度代表什么?

•培养基中的葡萄糖浓度范围从1g/L(5.5mM)到10g/L(55mM)

•5.5mM的葡萄糖浓度与体内正常血糖的浓度类似

•高糖培养基可以满足肿瘤细胞等非生理状态细胞的体外培养需求

•选择高糖还是低糖培养基?

•根据不同细胞类型选择

通常原代细胞、干细胞使用低糖培养基

永生细胞系等病理状态的细胞使用高糖培养基


2、丙酮酸钠

•作用

•葡萄糖不足时为细胞提供碳源

•直接进入三羧酸循环,可以被快速利用

•什么情况下添加丙酮酸钠?

•之前培养条件已含有丙酮酸钠

•代谢旺盛的细胞

丙酮酸钠的贮存液浓度一般为50mM,-20℃保存,培养基中的终浓度为1mM。


3、酚红

•pH值指示剂

•培养基颜色的变化帮助细胞培养者判断是否需要换液等操作

•什么情况下建议选择无酚红培养基?

酚红可以模拟固醇类激素的作用(特别是雌激素),干预某些细胞在克隆级密度时生长。为避免固醇类反应,在干细胞培养或者进行低密度细胞生长时,应使用无酚红的培养基。


4、HEPES

•作用

•稳定pH值

•本身没有营养价值,会提高渗透压,并降低酚红对pH值的指示作用

•什么情况下需要加HEPES?

•培养条件pH波动剧烈

•细胞对pH敏感

Hepes的贮存液浓度一般为1M,常温保存。培养基中的终浓度为25mM


5、谷氨酰胺

几乎所有的细胞对谷氨酰胺都有胶高的要求。谷氨酰胺脱掉氨基后,可作为培养细胞的能量来源,参与蛋白质的合成和能量代谢。在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡。所以,各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。

谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置-20℃冰冻保存,用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4度冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。

试验操作中常配制高浓度(100倍)的谷氨酰胺溶液(1ml/支),分装使用,-20℃保存。使用时,每支1ml的谷氨酰胺加入到99ml完全培养基中,使其终浓度为2mM培养基。

误区:培养基中的谷氨酰胺容易降解,需要不断补充

正确方案:如果正确使用,一般不需要补加,如:4℃避光保存;分装,不要反复预热。


6、NaHCO3

•作用

与CO2一起形成缓冲系统,保持培养基PH值稳定。


7、GlutaMAXTM

•GlutaMAXTM 完美替代L-谷氨酰胺

•极为稳定,可常温、2~8℃以及-5~-20℃保存

•毒性氨积累最小化

•使细胞的性能达到最佳

•提高细胞成活和生长

•建议不要将其用于昆虫细胞培养

•由于释放谷氨酰胺有一定的延迟,不建议用于刚复苏的细胞


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