商城导航
  • 分子生物学
    核酸纯化
    基因组DNA提取
    质粒提取
    核酸采集与保护
    DNA产物纯化及凝胶回收
    RNA提取
    磁珠法核酸提取
    核酸纯化其他
    PCR相关
    荧光定量PCR
    一般PCR产品
    RT/PCR
    PCR其他产品
    分子标准品
    核酸电泳及其他
    DNA MARKER
    核酸其他及电泳
    RNA MARKER
    特殊标记MARKER
    克隆
    感受态细胞
    连接酶
    克隆其他
    限制性内切酶
    菌株
    质粒载体
    分子相关
    点突变及基因突变检测
    二代测序产品
    分子杂交
    分子其他
    甲基化
    PCR Array
    肿瘤与疾病 PCR Array
    信号通路 PCR Array
    试剂盒 PCR Array
    生物过程 PCR Array
    免疫 PCR Array
    分子功能 PCR Array
    miRNA PCR Array
    lncRNA PCR Array
    circRNA PCR Array
    ARG PCR Array
  • 抗体
    常用一抗
    内参抗体
    标签抗体
    二抗相关
    标记二抗
    二抗
    一抗
    综合一抗
    流式抗体
    抗体相关
    抗体标记
    流式相关试剂
    抗体同型对照
    抗体其他
  • 免疫蛋白研究
    蛋白检测
    Western Blot
    蛋白提取
    蛋白纯化
    蛋白定量
    蛋白Marker
    蛋白电泳
    免疫组化
    ELISA
    ELISA辅助
    蛋白芯片
    四聚体
    蛋白相关
    蛋白其他
    蛋白质与多肽
    蛋白/细胞因子
    免疫沉淀
    RNA/RNP互作
    IVD相关
    IVD原料
    免疫蛋白其他
    免疫蛋白其他试剂盒
  • 细胞生物学
    细胞分析
    细胞凋亡
    细胞增殖
    细胞培养与转染
    基础培养基
    细胞冻存
    细胞污染去除与预防
    3D培养
    细胞培养其他
    细胞转染
    细胞分离
    无血清细胞培养基
    NK,CIK,CAR-T产品
    干细胞产品
    抗体生产培养基
    无血清培养基配套产品
    细胞株
    细胞培养微载体
    牛血清
    其他血清
    外泌体
    外泌体提取纯化
  • 生化试剂
    染料/染色剂
    荧光染料
    染色剂
    生化相关
    生命科学
    生化试剂盒
    其他生化试剂
    纯化相关
    层析填料树脂
    培养基
    酵母缺陷型培养基
    发酵
    微生物检测
    微生物培养基
    标品
    分析对照品/标准品
    其他生化
    磁珠
    通用缓冲液
    内毒素检测鲎试剂
  • 耗材
    PCR相关
    PCR耗材
    耗材其他相关
    通用耗材
    膜/过滤
    转印膜
    滤器
    膜其他
    滤膜
    滤纸
    细胞相关
    细胞培养耗材
    TRANSWELL
    流式耗材
    蛋白研究相关
    WB相关耗材
    免疫组化耗材
    激光共聚焦耗材
    动物手术器械
    手术器械包
    剪刀
    蛙类手术器械
    手术刀∣刀柄∣刀片
    镊子
    骨剪∣骨钳
    伤口缝合∣止血
    消毒∣灭菌∣防护
    拉钩∣撑开器
    刮匙∣刮铲∣探针
    动物标记
    固定∣备皮∣钻孔
    呼吸麻醉
    注射和给药
    心脑血管研究
    钳子
    取样∣接种∣制标
  • 仪器
    电泳设备
    蛋白电泳整机
    垂直蛋白电泳配件
    蛋白转印配件
    电泳其它配件
    电泳仪电源
    水平电泳配件
    水平电泳整机
    恒温震荡金属浴
    摇床
    印迹系统
    摇床配件
    金属浴配件
    转印装置
    核酸分析
    PCR仪
    核酸提取仪相关
    分液相关
    移液器
ABUIABAEGAAg2cem8wUo9P7qsgQwsAk40gs

0571-86893171

工作日8:30-17:30

细胞培养问题集

 二维码 8
发表时间:2021-09-10 14:45


01     复苏细胞的正确打开方式?


复苏过程应快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重结晶。

冻存细胞从液氮中取出后,立即放入37℃水浴中,轻轻摇动冷冻管,使其在1 分钟内全部融化(不要超过3 分钟)。

解冻后的细胞可以直接接种到含有完全培养液的细胞培养瓶中直接进行培养,24小时后再用新鲜完全培养液替换旧培养液,以去除DMSO。

如果细胞对冷冻保护剂特别敏感,解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂,然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中。

注:操作时戴好手套,防止冻伤;带上防护眼镜可以防止液氮罐里刚刚拿出来的管子液氮爆炸……


微信图片_20210910134641.jpg

02     细胞培养时能否更换培养基种类?


首先得确定现在用的培养基是否适合您的细胞生长。

细胞培养过程中,细胞增殖和形态正常的情况下最好不要更换培养基,细胞都有各自适应的培养基,更换培养条件,细胞可能无法快速适应,导致细胞死亡。

若必须更换,可尝试半换,让细胞逐渐适应新的培养基。

更换培养基的方法:

如果是贴壁生长的细胞, 一般可以直接把培养液吸掉, 再加入新的。加的时候注意不要对着长细胞的那一面。

如果是悬浮型的, 就需要低速离心 (把所有的细胞和培养液转移到离心管里, 或有些离心机配有直接离心细胞培养皿的装置), 然后再吸掉上清液。加入新的培养液使细胞重新悬浮。


微信图片_20210910134643.jpg


03     细胞培养时能否更换胎牛血清?


首先要确定更换胎牛血清的理由,如果细胞培养无异常的话,不建议随意更换不同品牌和来源的胎牛血清。

血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的来源(血源地)和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同地域和等级的血清,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞死亡。

如果是使用的胎牛血清出现了问题,比如保存不当或操作不当导致血清成分析出、混浊、污染等情况,可以优先更换同品牌、等级、批次的血清。

如果是产品质量问题更换血清品牌的话,需要用一批细胞进行预实验才行,以保证细胞能够正常培养。

另外大家在购买胎牛血清的时候要选择正规来源和经过海关检疫胎牛血清,非正规来源的胎牛血清有很多安全隐患,对实验室、操作人员、细胞培养、实验数据都有很大的影响。(可以参考底部推荐文章)


微信图片_20210910134649.jpg


04     一般在拿到细胞后,应该注意什么?


收到细胞后先不要开盖,放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议对收细胞时的培养基拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,显微镜下拍细胞100X,200X各一张),排除细胞本身污染的情况;收到细胞未开封,出现污染状况一般可以再申请免费发送一株细胞。

收到细胞时如无异常情况,请在显微镜下观察细胞密度,如为贴壁细胞,未超过80%汇合度时,将培养瓶中培养液吸出,留下10ml培养液继续培养;超过80%汇合度时,请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞,吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟,吸出上清,管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。

细胞消化液建议使用PBS配制,慎用Hanks液配制。


微信图片_20210910134652.jpg


05     培养细胞什么时候需要换液?



视细胞生长密度而定,或遵照细胞株基本数据上的更换时间,按时更换培养基即可。


微信图片_20210910134654.jpg


06     培养基到底要不要加抗生素?


除于特殊筛选系统中外,一般正常培养状态下,培养基中不应添加任何抗生素。

如果是没有进行过细胞培养的新手,对无菌技术没有信心的,或者提取的原代细胞,怕污染的,可以适量添加抗生素。

抗生素本身也是有毒性的,有些抗生素的药效浓度水平与毒效浓度水平非常接近,对细胞多少有伤害。


微信图片_20210910134657.jpg


07     培养箱二氧化碳使用比例如何判定?


一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统,而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7g时,细胞培养时应使用10%CO2;当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时,则应使用5CO2培养细胞。


微信图片_20210910134659.jpg


08     L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗?


L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后,L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解,但是确切的降解率一直没有最终定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成,而氨对于一些细胞具有毒性。


微信图片_20210910134702.jpg


09     培养基里的粉红色是什么?


酚红一般作为培养基中pH值的指标:当培养基呈中性时为红色,呈酸性时为黄色,碱性时为紫色。另外,酚红可以模拟类固醇激素(特别是雌激素)的作用。如果要避免类固醇反应,可以在无酚红的培养基里进行培养。


微信图片_20210910134704.jpg


10     胰酶里EDTA的作用?


二价的离子会抑制胰酶活性,所以加入EDTA可以螯合掉Ca、Mg这样的二价离子。

胰酶也要注意不要反复冻融哦!


微信图片_20210910134707.jpg


11     如何避免细胞培养过程中的污染?


主要还是考虑无菌环境,尽量做好操作台的灭菌,别把培养基滴落在生物安全柜的入风口,别在培养箱里把培养基打翻。这两个地方霉菌一旦滋生,那你就只能等着用甲醛熏蒸了。

紫外无法杀灭霉菌,酒精也不行,只能用甲醛熏蒸,但是一定要注意安全。复苏的时候,水浴锅也需要进行灭菌处理。一旦出现污染,不要急,能救的就用抗生素救一下,但是一般情况下,选择扔掉……

避免交叉感染,要不只能整个实验室消毒了。


微信图片_20210910134709.jpg

空心方块集散分割线.gif


END

—————————————————————————————————
0571-86893171

order@ny-bio.com
浙江省杭州市江干区新塘路672号中豪五星国际商业中心
 
 
在线客服
 
 
 工作时间
周一至周五 :8:30-17:30
 联系方式
微信:nuoyang004
 
 
会员登录
登录
其他帐号登录:
我的资料
我的收藏
购物车
0
留言