细胞凋亡（Annexin V/JC-1/TUNEL/细胞周期）专题-4ABIO四正柏

关于细胞凋亡：

细胞凋亡（apoptosis）指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。

迄今为止凋亡过程确切机制尚不完全清楚。而凋亡过程的紊乱可能与许多疾病的发生有直接或间接的关系。如肿瘤、自身免疫性疾病等，能够诱发细胞凋亡的因素很多，如射线、药物等。细胞凋亡的临床应用基础研究最终能够有利于疾病机制的阐明，以及新疗法的探索及问世。

一、【Annexin V凋亡检测试剂盒】     二、【线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）】    三、【TUNEL检测试剂盒】    四、【细胞周期检测试剂盒】     五、参考文献

一、【Annexin V凋亡检测试剂盒】

产品特点：

● 100%自主研发，国家知识产品全局批准专利号20150415724.7；

● 国内最高性价比凋亡检测试剂盒，质量媲美国际品牌；

● 分群清晰, 有多种标记可供选择 (FITC/PI, Alexa Fluor 488/PI, Alexa Fluor 647/PI, eGFP/PI, PE/7-AAD等)；

● 操作简便, 减少人为造成的假阳性；

● 数百篇SCI期刊文章采用: 如Advanced Materials (IF: 27.398）, Advanced Functional Materials (IF: 18.836）, Nature Microbiology (IF: 15:54）, ACS NANO (IF: 14.588）.

细胞凋亡检测试剂

【Tips: 如何选择凋亡试剂盒 ？】

● 7氨基放线菌素D（7-AAD）是一种核酸染料，在流式细胞术中用于鉴定死细胞，其作用与PI相似, 但相较于PI有一定 的优势。即PI检测时同时占据FL-2和FL-3两个通道（根据不同仪器激光片设置），而7-AAD则只占FL-3通道，在多 色分析中更有利；

● Annexin V-FITC/PI性价比最高，也是使用最广泛的凋亡试剂盒；

● Annexin V-Alexa Fluor 488/PI与Annexin V-FITC/PI在流式细胞仪上检测用相同的通道，但是Alexa Fluor 488 这种染料荧光强度和稳定性优于FITC，细胞分群更明显；

● Annexin V-eGFP比Annexin V-FITC更稳定，效期更长，可以-20℃保存；

● Annexin V-Alexa Fluor 647/PI用于已转染GFP细胞的凋亡检测优势明显，而且无需调补偿，避免了人为因素的干扰；

● 用Annexin V-FITC/7-AAD凋亡检测试剂盒（FXP145）和Annexin V-Alexa Fluor 488/7-AAD凋亡检测试剂盒 （FXP146）检测带有RFP荧光或者用阿奇霉素处理过的细胞。

【实验步骤】

【Annexin V凋亡实验常见问题及解决方法】

【01】 药物作用细胞后，上清液里悬浮的细胞需要收集吗？

需要，因为上清液也存在一些凋亡的细胞。与消化的单细胞悬液混合后，进行染色。

【02】 为什么Annexin V+细胞比例超出了文献中的比例或超出了预期的比例？

a. 确认实验方法和参考文献中的是否一致（如细胞系来源、药物作用时间和药物浓度）；

b. 排除是否由于贴壁细胞消化过度，导致细胞膜损害，大量磷脂酰丝氨酸（PS）外翻与Annexin V结合而产生的假阳性结果；

c. 细胞本身活力太差，也会导致Annexin V阳性比例偏高，可通过台盼蓝染色判断细胞活力。

【03】 Annexin V+比例偏低或没有阳性？

a. 首先确认细胞是否被成功诱导凋亡，通过阳性对照药物（如喜树碱）或者阳性诱导方法（如紫外照射）来排除这一情况;

b. 考虑是否存在凋亡细胞的缺失，如没有收集细胞上清，圈门时候没有圈到凋亡的细胞群体;

c. 确认胰酶中是否含有过多的EDTA，因为Annexin V是 Ca2+ 依赖性蛋白，EDTA会鳌合 Ca2+ 离子，影响Annexin V和PS 的结合。

二、【线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）】

产品特点：

● 性价比高，现货供应，多种规格；

● 操作简便，产品性能稳定。

线粒体膜电位检测试剂产品列表

【实验步骤】

三、【TUNEL检测试剂盒】

产品特点：

● 适用于组织样本（石蜡切片和冰冻切片）和细胞的凋亡检测；

● 快速、直接、灵敏、稳定；

● 荧光染料直接标记dUTP，可直接进行原位检测，一步即可完成，无需抗dUTP的抗体。

TUNEL检测试剂盒产品列表

【TUNEL实验步骤】

四、【细胞周期检测试剂盒】

产品特点：

● 操作简单，方便；

● 性价比高，产品质量可靠；

● 结果稳定可靠，分期明显，CV值低

细胞周期检测试剂产品列表

五、部分引用文献