商城导航
  • 分子生物学
    核酸纯化
    基因组DNA提取
    质粒提取
    核酸采集与保护
    DNA产物纯化及凝胶回收
    RNA提取
    磁珠法核酸提取
    核酸纯化其他
    PCR相关
    荧光定量PCR
    一般PCR产品
    RT/PCR
    PCR其他产品
    分子标准品
    核酸电泳及其他
    DNA MARKER
    核酸其他及电泳
    RNA MARKER
    特殊标记MARKER
    克隆
    感受态细胞
    连接酶
    克隆其他
    限制性内切酶
    菌株
    质粒载体
    分子相关
    点突变及基因突变检测
    二代测序产品
    分子杂交
    分子其他
    甲基化
    PCR Array
    肿瘤与疾病 PCR Array
    信号通路 PCR Array
    试剂盒 PCR Array
    生物过程 PCR Array
    免疫 PCR Array
    分子功能 PCR Array
    miRNA PCR Array
    lncRNA PCR Array
    circRNA PCR Array
    ARG PCR Array
  • 抗体
    常用一抗
    内参抗体
    标签抗体
    二抗相关
    标记二抗
    二抗
    一抗
    综合一抗
    流式抗体
    抗体相关
    抗体标记
    流式相关试剂
    抗体同型对照
    抗体其他
  • 免疫蛋白研究
    蛋白检测
    Western Blot
    蛋白提取
    蛋白纯化
    蛋白定量
    蛋白Marker
    蛋白电泳
    免疫组化
    ELISA
    ELISA辅助
    蛋白芯片
    四聚体
    蛋白相关
    蛋白其他
    蛋白质与多肽
    蛋白/细胞因子
    免疫沉淀
    RNA/RNP互作
    IVD相关
    IVD原料
    免疫蛋白其他
    免疫蛋白其他试剂盒
  • 细胞生物学
    细胞分析
    细胞凋亡
    细胞增殖
    细胞培养与转染
    基础培养基
    细胞冻存
    细胞污染去除与预防
    3D培养
    细胞培养其他
    细胞转染
    细胞分离
    无血清细胞培养基
    NK,CIK,CAR-T产品
    干细胞产品
    抗体生产培养基
    无血清培养基配套产品
    细胞株
    细胞培养微载体
    牛血清
    其他血清
    外泌体
    外泌体提取纯化
  • 生化试剂
    染料/染色剂
    荧光染料
    染色剂
    生化相关
    生命科学
    生化试剂盒
    其他生化试剂
    纯化相关
    层析填料树脂
    培养基
    酵母缺陷型培养基
    发酵
    微生物检测
    微生物培养基
    标品
    分析对照品/标准品
    其他生化
    磁珠
    通用缓冲液
    内毒素检测鲎试剂
  • 耗材
    PCR相关
    PCR耗材
    耗材其他相关
    通用耗材
    膜/过滤
    转印膜
    滤器
    膜其他
    滤膜
    滤纸
    细胞相关
    细胞培养耗材
    TRANSWELL
    流式耗材
    蛋白研究相关
    WB相关耗材
    免疫组化耗材
    激光共聚焦耗材
    动物手术器械
    手术器械包
    剪刀
    蛙类手术器械
    手术刀∣刀柄∣刀片
    镊子
    骨剪∣骨钳
    伤口缝合∣止血
    消毒∣灭菌∣防护
    拉钩∣撑开器
    刮匙∣刮铲∣探针
    动物标记
    固定∣备皮∣钻孔
    呼吸麻醉
    注射和给药
    心脑血管研究
    钳子
    取样∣接种∣制标
  • 仪器
    电泳设备
    蛋白电泳整机
    垂直蛋白电泳配件
    蛋白转印配件
    电泳其它配件
    电泳仪电源
    水平电泳配件
    水平电泳整机
    恒温震荡金属浴
    摇床
    印迹系统
    摇床配件
    金属浴配件
    转印装置
    核酸分析
    PCR仪
    核酸提取仪相关
    分液相关
    移液器
ABUIABAEGAAg2cem8wUo9P7qsgQwsAk40gs

0571-86893171

工作日8:30-17:30

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS[Wako]

 二维码 65
发表时间:2020-10-21 16:02作者:诺扬生物

201807021537375760.jpg

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒
MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS


MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS采用磷酯酰丝氨酸(PS)亲和Tim4蛋白固化磁珠(PS亲和法)的方法可以简便快捷地提取高纯度的完整外泌体和其他细胞外囊泡(EVs)。如果想要得到更高纯度的外泌体,请使用10,000×g离心后的上清。

该试剂盒使用含有EDTA的中性洗脱缓冲液将外泌体完整洗脱下来,所提取的完整外泌体和其他EVs可用于不同实验,包括电镜分析(TEM)、纳米粒子追踪(NTA)分析、投喂实验、分子组成(蛋白质、脂质、核酸等)分析等。



细胞膜表面磷脂酰丝氨酸的亲和方法

201807021519119195.jpg

Tim4蛋白固化磁珠,在金属离子存在的条件下亲和细胞外囊泡表面的磷酯酰丝氨酸(PS),然后使用含有EDTA的洗脱液进行洗脱,捕获高纯度的完整细胞外囊泡


◆优点・特色

201605060941375916.jpg


使用新型亲和纯化方法

201604201530319407.jpg


无需进行超滤

● 使用磁珠改进了操作

● 流程优化

※ 高重复性     

201807021519005627.jpg

样品类型:细胞培养上清、血清、血浆、尿液等。


● 可以纯化高纯度完整的细胞外囊泡

● 可以从细胞上清液、血清、血浆和尿液中纯化外囊泡

● 重复性高,回收量稳定

● 简易操作(约3.5小时)

● 启用多个样品(无需超速离心)



产品列表

                                                                                                                                           

产品名称

包装规格

保存条件

MagCapture™

10次

2次

2-10°C

Exosome Isolation Kit PS

(产品编号:293-77601

(产品编号:299-77603

试剂盒成分<10 次><2 次>
(1) 链霉亲和素磁珠 600 μL×1 管 120 μL×1 管
(2)生物素标记的外泌体捕获 100 μL×1 管 20 μL×1 管
(3)外泌体捕获免疫固定缓冲液 35 mL×1 瓶 7 mL×1 瓶
(4)外泌体结合增强剂(×500) 500 μL×1 管 100 μL×1 管
(5)洗涤缓冲液 75 mL×2 瓶 30 mL×2 瓶
(6)外泌体洗脱缓冲液 5 mL×1 瓶 1 mL×1 瓶
(7)反应管 22 管 1 管




*每套试剂盒能完成5次回收实验,即实际使用量为10×5次/Kit与2×5次/Kit

案例•应用


从血清、血浆、尿液中提取的细胞外囊泡的分析


从人血清中提取外泌体的产量比较

  使用该试剂盒,超离法和抗体亲和法提取人血清的外泌体,接着用CD9和CD63抗体进行免疫印迹实验。

201807021528192757.jpg

● 检测抗体

      抗CD9兔多抗,System Bioscience公司

      抗CD63兔多抗,System Bioscience公司

● 免疫印迹(WB)数据

      各样品结果相当于150μL的血清样本。从100μL提取物中取出15μL,添加5μL的4×SDS样品缓冲液,全部上样。

从人EDTA血浆中提取外泌体

  分别从1mL的EDTA血浆、EDTA血浆(超滤更换缓冲液)、人血清中提取外泌体,进行WB检测(抗Flotillin2抗体)。

201807021529264978.jpg


● 检测抗体

      抗Flotillin-2小鼠单抗(29/Fotillin-2),BD Bioscience公司

● 使用样品量

      各1mL

● 免疫印迹(WB)数据

      各样品结果分别对应150μL样品量。从100μL提取物中取出15μL,添加5μL的 4×SDS样品缓冲液,全部上样。


从人尿液中提取外泌体的回收量比较

  1mL人尿液分别通过本试剂盒、聚合物沉淀法、超离法进行外泌体回收,并做免疫印迹(WB)检测(抗CD9抗体)。

201807021535236845.jpg


● 检测抗体

      抗CD9兔多抗,System Biosciences公司

● 使用样品量

      各1mL

● 免疫印迹(WB)数据

      各样品结果分别对应150μL尿液样品。从100μL提取物中取出15μL,加入5μL的 4×SDS样品缓冲液,全部上样。


◆与传统沉淀法的功能比较实验


  分别用本试剂盒、超离心法和聚合物沉淀法从K562(人慢性骨髓性白血病)细胞培养上清(无血清培养上清或10%Exosome-depleted FBS添加培养基)提取外泌体,分别比较三种方法的外泌体回收量和外泌体纯度。


MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS【PS亲和法】


  按照试剂盒的操作说明(反应时间:3小时),从1mL经过离心处理(10,000×g,30min)的K562细胞培养上清(无血清培养基或10% Exosome-depleted FBS添加培养基※1)中提取外泌体。

超速离心法

  将10mL经过离心处理(10,000×g,30min)的K562细胞培养上清(无血清培养基或10% Exosome-depleted FBS添加培养基※1)进行超离(110,000×g,70min),用TBS缓冲液重悬沉淀物后,再进行超离(110,000×g,70min),回收沉淀部分。

聚合物沉淀法

  从1mL经过离心处理(10,000×g,30min)的K562细胞培养上清(无血清培养基或10% Exosome-depleted FBS添加培养基※1)中,按照市售的A公司产品的操作说明(静置时间:过夜)提取外泌体。

※1:110,000×g离心2小时,在不吸到沉淀的前提下回收上清。

比较提取的外泌体的透射电子显微镜(TEM)分析结果和纳米粒子追踪(NTA)分析结果

  分别用本试剂盒、超离法、聚合物沉淀法提取外泌体,用NanoSight LM10检测外泌体片段的粒子直径。另外,用最终浓度为2%的多聚甲醛固定提取到的外泌体片段(2~4×1010 particles),在透射电子显微镜进行分析。


201810121416178383.png

电子显微镜图像 数据提供:金泽大学 医学系 华山教授、大阪大学 iFReC 中井先生


MagCapture™可提取到很多100nm左右的粒子,在透射电子显微镜中也可以确认到很多细胞外囊泡。

K562细胞培养上清提取的外泌体回收量和纯度的比较(无血清培养基)

  用PS亲和法、超离法和聚合物沉淀法从K562 细胞培养上清(无血清培养基)获得样品进行电泳。接着用银染色和WB法(CD63, Flotilin-2和Lamp-1抗体)进行实验。



201810121416436286.png


201810121416506794.png

回收量,不是回收率

● 检测抗体

     抗CD63小鼠单抗(MEM-259)

     抗Flotillin-2 小鼠单抗   (29/Flotillin-2),BD Bioscience公司

     抗Lamp-1小鼠单抗 (25/Lamp-1),BD Bioscience公司

K562细胞培养上清提取外泌体的回收量和纯度的比较(10%FBS-添加培养基)


  用MagCapture™外泌体提取试剂盒 、超离法和聚合物沉淀法,从K562 细胞培养上清(10% 去外泌体 FBS补充培养基)获得样品进行电泳,用银染法和WB法(CD63、Lamp-1和Flotilin-2抗体)进行实验。同时,对外泌体提取片段进行质谱测定,比较所有测定的多肽中来自K562细胞的人来源多肽的比例(由于添加到细胞培养基的FBS中牛蛋白聚集体是混杂的,所以人来源多肽的比率会下降)。


201810121417073780.png


● 检测抗体

     抗CD63小鼠单抗(MEM-259)

     抗Flotillin-2小鼠单抗 (29/Flotillin-2),BD Bioscience公司

     抗Lamp-1小鼠单抗(25/Lamp-1),BD Bioscience公司

     健康人血清来源的外泌体中提取miRNA和mRNA的回收量比较


实验数据

①运用不同方法提取外泌体并比较从中提取的microRNA和mRNA的回收量

通过超离法和PS亲和法将EVs从正常人血清中分离,然后使用microRNA提取试剂盒(产品编号295-71701)提取RNA。通过qRT-PCR分析提取的RNA,并比较microRNA (let-7a, miR-16, miR-92a, miR-142-3p)、mRNA (GAPDH, PIK3CB)的Ct值。


201810121421422058.png

相比超离法,PS亲和法提取所得EVs中的microRNA和mRNA得到更高产量。


②运用不同的RNA提取方法提取microRNA和mRNA的回收量比较

  运用PS亲和法将EVs从正常人血清中分离,然后使用microRNA提取试剂盒(产品编号295-71701)或基于AGPC法的试剂提取RNA。通过qRT-PCR分析提取的RNA,并比较microRNA (let-7a, miR-16, miR-92a, miR-142-3p)、mRNA (GAPDH, PIK3CB)的Ct值。


201810121421495358.png

对比AGPC法,使用microRNA提取试剂盒更能有效提取PS亲和法纯化所得EVs中的microRNA和mRNA


◆外泌体蛋白质组学分析


<实验内容及结果>

  分别利用PS亲和法、超离法、聚合物沉淀法,从含10% FBS(不含外泌体)的K562细胞培养上清液中提取外泌体。将提取样品用10%聚丙烯酰胺电泳分离,剪切出全部的蛋白质条带。然后在凝胶内进行消化,用LC-MS对蛋白质进行检测。对上述三种方法提取的外泌体进行蛋白质组合的相关性比较。

比较通过MASS分析鉴定的前10个蛋白质

白色柱:源自外囊泡的人类蛋白质

灰色柱:来自FBS的牛蛋白污染物

红 色:来自外囊泡的标记蛋白

样品:K562细胞培养基(含有10%去除外泌体胎牛血清)




PS亲和法

超离法

聚合物沉淀法

1

71kDa热休克同源蛋白DNA依赖蛋白激酶催化亚基基因补体C3
(Heat shock cognate 71kDa protein)(DNA-dependent protein kinase catalytic subunit)(Complement C3)

2

膜联蛋白A6铁转蛋白受体1α2-巨球蛋
(Annexin A6)(Transferrin receptor protein1)(Alpha-2-macroglobulin)

3

铁转蛋白受体1血清白蛋白纤连蛋白
(Transferrin receptor protein1)(Serum albumin)(Fibronectin)

4

V-ATP酶A亚基ATP依赖RNA解旋酶血清白蛋白
(V-type proton ATpase catalytic subunit A)(ATP-dependent RNA helicase A)(Serum albumin)

5

浮舰蛋白-2微管蛋白β5血小板反应蛋白-1
(Flotillin-2)(Tubulin beta-5 chain)(Thrombospondin-1)

6

程序性细胞死亡6互作蛋白(Programmed cell death 6-interacting protein)71kDa热休克同源蛋白补体C4
(Heat shock cognate 71kDa protein)(Complement C4)

7

细胞表面抗原4F2重链脂肪酸合成酶α-1抗蛋白酶
(4F2 cell-surface antigen heavy chain )(Fatty acid synthase)(Alpha-1-antiproteinase)

8

膜联蛋白A1细胞表面抗原4F2重链载脂蛋白-β-100
(Annexin A1)(4F2 cell-surface antigen heavy chain)(Apolipoprotein-β-100)

9

220kDa激酶D相互作用底物U5小核核糖核蛋白的解旋酶胎儿血红蛋白亚单位
(Kinase D-interacting substrate of 220kDa)(U5 small nuclear ribonucleoprotein helicase)(Hemoglobin fetal subunit beta)

10

膜联蛋白A2β4微管蛋白β5微管蛋白
(Annexin A2)(Tubulin beta-4B chain)(Tubulin beta-5 chain)
                                                                                                                                                                                                                                               



201810121422115750.png

成对组合相关性比较


201810121422188738.png


应用数据


201810121422257650.png


Protein Assay BCA Kit检测外泌体的蛋白质浓度


  Protein Assay BCA Kit是利用二辛可宁酸(BCA)定量检测溶液中的蛋白质浓度的试剂盒,是蛋白质定量检测法中最通用的方法。其原理为,碱性条件下的蛋白质Cu2+离子被还原为Cu+。Cu+与BCA形成络合物,即产生紫色螯合物,蛋白质浓度与紫色螯合物颜色深浅有关,通过测定562nm处的吸光度,并与标准曲线做比照,即可定量溶液中的蛋白质浓度。

利用MagCapture™外泌体提取试剂盒从细胞培养上清液中提取外泌体,通过Protein Assay BCA Kit高灵敏的检测外泌体中蛋白质浓度。


【实验内容及结果】

  将通过MagCapture™外泌体提取试剂盒提取的25μL外泌体溶液分注于96孔板中,加入 Protein Assay BCA Kit中试剂A和试剂B混合液200μL。之后60℃孵育30分钟,检测560nm吸光度(图1)。结果表明,通过Protein Assay BCA Kit的高灵敏度检测,可测定提取后外泌体中蛋白质浓度。

201810121422347809.png

图1. Protein Assay BCA Kit 检测BSA的检量线和提取的外泌体蛋白质浓度的检测

<BCA Assay 操作概要>

由于外泌体蛋白质浓度相当低,因此BCA测定时不要稀释样品。

①    将BSA标准溶液按照250、125、62.5、31.25、15.625μg/mL和空白对照,分别每孔25μL加到96孔板中。

②    分别把提取的外泌体和洗脱缓冲液(空白)按照每孔25μL加入96孔板。

③    把200μL Protein Assay BCA Kit(产品编号:297-73101)的试剂A盒试剂B混合液(A:B=50:1)加入放有样品的孔板中。

④    60℃孵育30分钟

⑤    室温条件下降低孔板温度

⑥    测定560nm的吸光度

产品编号

产品名称

包装

零售价

优惠价

297-73101

Protein Assay BCA Kit

250次用

1680

1512

蛋白测定试剂盒(二喹啉甲酸)

015-25613

2 mg/mL Albumin Solution   from Bovine Serum

1mL×10

咨询

咨询

2mg/mL 牛血清蛋白溶液


◆外泌体的标记和Hela细胞导入实验


【实验概要】

用PKH67(Sigma公司)标记MagCapture™ 外泌体提取试剂盒提取的细胞外囊泡, Hela细胞导入确认


<外泌体PKH67标记>

1. MagCapture™ 外泌体提取试剂盒提取外泌体(实验当天从K562细胞培养上清液提取外泌体)

2. 用BCA Assay和NanoSight检测样品的蛋白质浓度和粒子浓度

3. 将相当于5μg*蛋白量的外泌体样品溶液分装至1.5mL管中。

*请配制合适的使用量

4. 将2.0μL的PKH linker溶解在0.25mL的DiluentC中。…4×Dye solution*

*请配制合适的使用量

5. 添加1/3样品量的4×Dye solution至样品中,混合后在室温中孵育5-10分钟。

6. 根据附带的操作说明用PBS平衡Exosome Spin Columns (MW 3000) (Thermo公司)。

7. 将100μL样品分别加入上述平衡后的旋转柱*中,离心(最大添加量:100μL)。

*准备必需的支数。

8. 将外泌体溶液*加入到已经接种好Hela细胞的培养皿中,24小时后用显微镜观察并利用流式细胞仪进行分析。

*根据实验调节外泌体添加量


201810121434294960.png

图1. PKH标记外泌体的细胞捕获观察


从16mL K562培养上清液中超滤浓缩得到4mL培养上清液作为样品,通过PS亲和法提取外泌体。

●      提取的外泌体蛋白质浓度:22.3ng/μL

●      粒子浓度:1.2×108 particles/mL

将上述标记的外泌体溶液全部加入接种好的Hela细胞中,24小时后用荧光显微镜(左)和流式细胞仪(右)检测捕获情况。

Opti-MEM:取相同量用PKH标记后添加到细胞中作为阴性对照。


201810121434366015.png


◆细胞培养上清•血清•血浆的预处理操作


  样品预处理:对样品进行1,200×g离心操作※1。如果要得到更高纯度的外泌体,则按照下述步骤对样品进行10,000×g离心操作※2。

  下文是细胞培养上清、血清/血浆的预处理方法。其他体液样品的预处理操作,请参考血清/血浆的实验步骤,做适当调整。


201810121434432996.png


更换缓冲液(限制过滤)操作

用50 mL TBS 缓冲液对1 mL 已经经过离心处理的EDTA 血浆样品进行缓冲液更换。

1. 把19 mL TBS 加进VivaSpin20(100K)中。

2. 把1 mL 离心过的EDTA 血浆上清添加在第1. 的VivaSpin20(100K)中,

 混匀。

3. 把第2. 的VivaSpin20(100K)在4℃下进行离心处理。

4. 减少上线的液体后,在VivaSpin20(100K)中追加10 mL TBS 缓冲液。

5. 4℃下离心处理。

6. 减少上面的液体后,在VivaSpin20(100K)中追加10 mL TBS 缓冲液。

7. 4℃下离心处理。

8. 减少上面的液体后,在VivaSpin20(100K)中追加11 mL TBS 缓冲液。

9. 4℃下离心处理直至样品液量达到1 mL 以下。

10. 进行提取。


◆MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 操作步骤


201810121434511850.png



货号

名称

规格

零售价

*优惠价*

299-77603

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒

2 tests

2240

¥2,016

MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS

(10次回收)

293-77601

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒

10 tests

8980

¥8,082

MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS

(50次回收)

◆相关产品

产品编号

产品名称

产品规格

零售价

优惠价

297-79201

PS Capture™外泌体ELISA试剂盒

96次

6510

5859

(抗小鼠IgG POD)

290-35591

Magnet Stand

1个

6720

6057

  MagCapture系列磁珠捕获用磁力架

299-77603

MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS

2次用

2240

2016

MagCapture外泌体提取试剂盒PS

293-77601

MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS

10次用

8980

8082

MagCapture外泌体提取试剂盒PS

016-27061

Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13)

20ul

1010

1109

抗CD63单抗(3-13)

012-27063

Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13)

100ul

3370

3233

抗CD63单抗(3-13)

CAC-SHI-EXO-M02-50UL

Anti CD63 for Exosome Isolation

50ul

咨询

咨询

CD63 外泌体提取抗体

CAC-SHI-EXO-M01-100UL

Anti CD9 for Exosome Isolation

100ul

咨询

咨询

外泌体分离抗体CD9

CAC-SHI-EXO-M02-100UL

Anti CD63 for Exosome Isolation

100ul

咨询

咨询

外泌体分离抗体CD63

CAC-SHI-EXO-M03-100UL

Anti CD81 for Exosome Isolation

100ul

咨询

咨询

外泌体分离抗体CD81

CSR-SHI-EXO-K010

ExoTrap ™ Exosome Isolation Spin Column Kit,

1 kit

咨询

咨询

for Protein Research

外泌体分离亲和柱套装,蛋白研究用

295-71701

microRNA Extractor ®SP Kit

50次用

6400

5760

microRNA 提取试剂盒


更多应用说明,请点击:

新型亲和性外泌体纯化法与外泌体高灵敏度检测应用


     欲了解相关产品请点击文字:
    相关资料

★MagCapture™ Exosome Isolation操作流程

★MagCaptureTM 外泌体分离试剂盒   常见问题

★外泌体提取操作记录

★成功研发提取纯度外泌体方法,有望革新癌症等的早期诊断和治疗效果判定技术

PS亲和法外泌体提取试剂盒相关文献


201810191526212098.png

点击图片下载外泌体册子


—————————————————————————————————
0571-86893171

order@ny-bio.com
浙江省杭州市江干区新塘路672号中豪五星国际商业中心
 
 
在线客服
 
 
 工作时间
周一至周五 :8:30-17:30
 联系方式
微信:nuoyang004
 
 
会员登录
登录
其他帐号登录:
我的资料
我的收藏
购物车
0
留言