siRNA/miRNA专题

siRNA对照

　　一个完整的siRNA干扰实验必须使用阴、阳性对照以及转染试剂等来确定设计的siRNA序列对于基因的特异性沉默。

阴性对照

　　阴性对照siRNA，是不会引起任何基因的沉默。实验中使用阴性对照能够帮助我们确认基因表达水平的降低是否是序列特异性的RNAi的结果。由于siRNA的合成方法、工艺以及转染试剂等因素可能导致广泛的基因沉默现象。如果没有阴性对照，研究人员很可能错误地将广泛的、非特异性基因沉默当作由RNAi引起的基因特异性沉默。 本公司提供 ：

　　和哺乳动物基因序列无同源性的通用阴性对照。

　　和哺乳动物基因序列无同源性的末端荧光标记 (5’ - FAM) 的通用阴性对照，方便我们使用流式细胞仪、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜等观察siRNA的转染情况，从而优化转染条件，提高转染效率。

　　与靶点siRNA序列有相同碱基组成，但排序不同且和mRNA无同源性的阴性对照；根据客户要求进行合成。

阳性对照

　　阳性对照是已知的可以高效沉默特定基因的siRNA，阳性对照作为一个实验的系统检查是很重要的。当siRNA阳性对照达到预期实验结果时，就能说明转染、RNA的提取和基因表达检测方法是可靠的。

　　本公司提供多种阳性对照，具体见下表：

RNAi系列合成优惠套餐

　　客户只需要提供基因序列、GeneID或者Accession Number，我们免费设计、选择合适的位点，保证至少一对可以有效的抑制相应基因的表达，即mRNA水平的抑制效率在70%以上（转染效率至少达90%）。若未筛选出有效的siRNA片段（客户需提供详细的Q-PCR结果和细胞转染数据做为参考。鉴于siRNA沉默原理，客户提供的WB结果，仅作为参考），本公司为您免费再次设计和合成！

　　Biomics silence siRNA Set I：价格￥1698
　　(目录号：CT0001)

注： 套餐中的阴性对照为赠送，该对照适用于大部分人，大鼠，小鼠的基因。少数基因不适用时，

客户可选择针对自己的基因和种属设计特定NC（另收费，按照普通siRNA价格计）。

　　Biomics silence siRNA Set II：价格￥2398
　　(目录号：CT0002)

注： 套餐中的阴性对照为赠送，该对照适用于大部分人，大鼠，小鼠的基因。少数基因不适用时，

客户可选择针对自己的基因和种属设计特定NC（另收费，按照普通siRNA价格计）。

　　Biomics silencer siRNA Set III：价格￥2180
　　(目录号：CT0003)

注： 套餐中的阴性对照为赠送，该对照适用于大部分人，大鼠，小鼠的基因。少数基因不适用时，

客户可选择针对自己的基因和种属设计特定NC（另收费，按照普通siRNA价格计）。

　　Biomics silencer siRNA Set IV：价格￥2898
　　(目录号：CT0004)

注： 套餐中的阴性对照为赠送，该对照适用于大部分人，大鼠，小鼠的基因。少数基因不适用时，

客户可选择针对自己的基因和种属设计特定NC（另收费，按照普通siRNA价格计）。

siRNA载体构建服务

（目标：抑制效率≥70％的基因沉默位点）

1.技术特点：

1.1多种siRNA表达载体，可以在细胞内直接转录出siRNA，行使其RNAi功能，包括：

1.1.1 U6启动子表达载体；

1.1.2 启动子表达载体；

1.1.3 U6、H1双启动子表达载体；

1.1.4 CMV启动子表达载体；

载体带有GFP标签可以监测转染效率。构建好的siRNA表达载体可直接用于转染细胞进行RNAi实验;

本公司还可根据客户需要提供各种商业化表达载体;

本公司可以为客户构建线性siRNA表达载体，shRNA表达载体，miRNA表达载体以及病毒型RNAi载体。

2.构建流程：

2.1 siRNA靶点设计；

客户提供靶基因的siRNA序列，由本公司将其克隆到siRNA表达载体上。

客户提供靶基因的相关信息（基因的mRNA序列或Genbank Accession No.），根据客户要求，本公司设计高效特异性的3-4条针对靶基因的siRNA。

2.2 合成设计好的DNA并退火形成双链DNA，克隆到客户要求的载体上。

2.3通过测序进行验证。

2.4构建成功的siRNA质粒连同测序报告、产品说明书一起寄送到客户手中。

注：可根据客户要求提供siRNA的阳性及阴性对照质粒。

3.质量保证：

符合设计要求的siRNA序列测序结果。

4.各种商业化表达载体:

产品编号	载体	启动子	筛选基因	标记基因
BV0011	pRNAi-U6H1/Neo	U6和H1	Neomycin	GFP
BV0012	pRNAi-H1.1/Neo	H1	Neomycin	GFP
BV0013	pRNAi-U6.1/Neo	U6	Neomycin	GFP
BV0014	pRNAi-CMV3.1/Neo	CMV	Neomycin	GFP
BV0015	pRNAi-CMV3.2/Neo	CMV	Neomycin	GFP
BV0016	pRNAi-CMV4.1/Neo	CMV	Neomycin	-
BV0109	pRNAi-hU6.2/Lenti	U6	Neomycin	-
BV0110	pRNAi-U6.2/Lenti	U6	Neomycin	GFP

miRNA mimics

miRNA inhibitor

miRNA inhibitor：化学修饰的专门针对细胞中特异的靶miRNA的抑制剂，可特异、高效地抑制生物体内源性miRNA的活性，是研究miRNA功能的必要工具。应用该产品可检测miRNAs所调节的基因表达和对信号通路的影响，对阐明miRNA在诸如细胞发育、增殖、分化和凋亡中的机理有重要意义，加速miRNA基因沉默效应的研究。它可以特异的靶向和敲除单个的miRNA分子。使用miRNA inhibitor可以用筛选miRNA靶位点；筛选调控某一基因表达的miRNA；筛选影响细胞发育过程的miRNA。

miRNA 对照

动物实验用miRNA

动物体内RNAi药物(siRNA﹑miRNA﹑shRNA等)的一般给药方法与途径

一般来说，给药方法可分为全身给药(systemic delivery)和局部给药(local delivery)。

迄今已有很多通过局部给药途径进行动物体内RNAi药物药效评价和国外RNA药物I-III期临床试验的报道。

◆给药方式：局部给药是将RNAi药物分子（siRNA﹑miRNA﹑shRNA等）通过注射﹑滴入﹑涂抹或喷雾等方式直接导进到一个特定的组织或器官中。

◆适用范围：局部给药的组织或器官包括眼部、耳部、鼻腔、呼吸道、肺部、皮肤（表皮、真皮和皮下组织）、膀胱、子宫腔等。

◆优势：局部给药可直接应用裸RNA药物分子作用于靶向器官或组织。另外，局部给药相对全身给药在用药量上要少一些。

由于血液中存有大量的核酸酶(Rnases)，会直接导致RNA药物分子的迅速降解，使得RNA干扰机制丧失或药效丢失。如何有效解决裸RNA药物分子在血液中的稳定性是十分关键的。

其解决方案包括：
1）化学修饰RNA分子（如，常规2′-OMe或胆固醇修饰等）
2）利用功能高分子或脂质体载体包裹裸RNA药物分子，使其达到在血液中稳定循环。
这样不仅解决了RNA药物分子在血液中的稳定性，同时，所做的修饰分子或包裹载体如具有特定靶向性，也可以解决RNA药物分子在全身传输中的组织器官靶向性难题，使其能够到达指定的病症部位或肿瘤组织。

动物体内RNAi药物(siRNA﹑miRNA﹑shRNA等)的一般给药用量参考

综合大多数报道的研究结果，进行动物体内实验时可参考如下用量剂量：

小鼠每次每个部位RNA给药量(小鼠一般体重约为15-25g)：0.05-0.50mg
大鼠每次每个部位RNA给药量(大鼠一般体重约为150-250g)：0.1-1.0mg

小鼠每次RNA给药量(小鼠一般体重约为15-25g)：0.5-5.0mg/kg
大鼠每次RNA给药量(大鼠一般体重约为150-250g)：1.0-10mg/kg

不同种类实验动物一次给药能耐受的最大剂量可参考下表（mL）

修饰和标记的miRNA

　　Biomics可对miRNA进行多种标记物的标记，包括FAM、Cy3、Cy5、胆固醇(cholesterol)、Biotin。相对于未标记的miRNA具有转染情况可视的优点，通过流式细胞仪、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜等可以观察到荧光标记的miRNA，方便优化转染条件、miRNA胞内定位等，同时可根据对转染过程的全程追踪来分析转染和蛋白表达的关系。研究表明，反义链5’端标记会影响实验效果，其他三个末端修饰后对活性几乎没影响，目前公认最好的是将荧光修饰标记在正义链的5’端位点。5’-荧光标记的miRNA有助于直接观察转染效率。本公司提供的5’-荧光标记的miRNA通常用FAM进行标记。