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富士胶片和光生物:CUBIC组织透明化试剂——应用实例更新 二维码
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发表时间:2023-02-28 16:05作者:诺扬生物来源:富士胶片和光生物 ![]() CUBIC Trial Kit是一款用于透明化技术CUBIC(Clear, Unobstructed Brain/Body Imaging Cocktails and Computational analysis)的试剂盒。 该方法由上田泰己教授和洲崎悦生教授等人开发。 只需将组织浸入试剂盒包含的溶液中,即可对小鼠大脑和全组织、灵长类的全脑和甲壳类的全组织进行透明化处理和折射率调整。 该方法有望应用于病理学研究和单细胞水平中的观察。 数据提供: 国立研究开发法人理化学研究所上田泰己教授、洲崎悦生教授 ◆CUBIC特点 ● 操作简单(只需浸入溶液) ● 可透明化整个器官 ● 小鼠全脑透明化只需两周 可进行透明化的组织 小鼠大脑和全组织,灵长类全脑,鱼类、甲壳类、甲虫等的全组织,骨骼(需进行脱钙处理) CUBIC Trial Kit试剂盒组成 1. ScaleCUBIC-1 Solution——250 mL x 1支 2. ScaleCUBIC-2 Solution——250 mL x 1支 3. Mounting Solution-1——40 mL x 1支 4. Mounting Solution-2——40 mL x 1支 透明化处理需准备 ▼ 试剂: 1. CUBIC Trial Kit 2. 多聚甲醛(产品编号:160-16061) 3. PBS×1(产品编号:164-25511) ▼ 实验用具: 1. 5 mL/15 mL/30 mL/50 mL锥形管(配合样品使用) 2. 摇床 3. 用于观察CUBIC透明化样品的荧光显微镜※和推荐物镜※※ ※共聚焦显微镜、双光子显微镜、光片显微镜 ※※与折射率 (RI=1.49)相匹配的物镜。 建议在使用之前咨询显微镜制造商。 ◆CUBIC实验方案事例 透明化实验方案示例(完整器官) 请注意,组织透明化实验方案中所用试剂用量、处理时间需根据样品尺寸进行调整。此外,建议在灌注固定后,取出并重新固定样品。 各个步骤中使用的试剂量约为12-15 mL,清洗时建议使用试剂量的5-10倍。 ![]() *每2天更换新溶液 **建议以2 : 8、3:7的比例混合 (RI = ~1.49) 试剂盒中的Mouting Solution 1 和 2 使用 ![]() 免疫组织染色实验方案示例 脑组织块的免疫染色案例,详细实验方案请见参考文献(1) *每2天更换新溶液 **分别用以下溶液稀释抗体 一抗:0.1% (v/v) Triton X-100, 0.5% (w/v) bovine serum albumin, 0.01% (w/v) sodium azide in PBS 二抗:0.1% (v/v) Triton X-100, 0.1% (w/v) bovine serum albumin, 0.01% (w/v) sodium azide in PBS ***建议以2 : 8、3:7的比例混合 (RI = ~1.49) 试剂盒中的Mouting Solution 1 和 2 使用。 ![]() ◆CUBIC应用案例 鱼类透明化案例 数据提供:东京海洋大学 海洋生物资源学院 二见邦彦老师 ![]() 图3.使用CUBIC的鱼类透明化案例 ![]() 图4.使用CUBIC处理后的鱼类内脏切片案例 ![]() 甲壳类(螃蟹·鼠妇)透明化案例 数据提供:浜松医科大学 医学分光应用寄附研究生 绀野在老师,冈崎茂俊老师 ![]() ![]() 甲虫(金龟子、独角仙、锹形虫)透明化案例 数据提供:东京大学大学院 理学系研究科生物科学专业 黑田真也老师 甲虫透明化需经过固定、漂白和透明化处理。 ![]() 小鼠全脑血管网络可视化案例 数据提供:Miyawaki, T. et al. : Nat Commun., 27, 11(2020). ![]() ![]() ![]() ※ 仅供实验研究用,不可用于临床诊断。
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