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四正柏:抗体标记试剂盒

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发表时间:2022-10-25 09:06作者:诺扬生物来源:四正柏


免疫荧光标记技术(Immunofluorescence labeling technique是免疫标记技术的一种,是指将已知的抗原或抗体分子标记上荧光素,使其与相对应的抗体或抗原发生特异性免疫反应,通过荧光显微镜或流式细胞术的方法,对待测物质进行定性或定量的分析,是生物学、医学领域广泛应用的免疫学技术。

在使用抗体进行信号检测的应用中(如WBIHCICCIF FACS),抗体标记有两种方法:直接标记和间接标记。

标准的WB使用间接标记,使用一抗检测目标抗原,然后再使用一个带有检测分子的二抗与一抗结合,但在某些情况下,最好跳过二抗及其相关步骤,使用荧光素标记抗体直接结合抗原,此种情况包括如下:

  1. 二抗有非特异性结合;

  2. 使用非标准生物的一抗,这时可能很难找到合适的二抗;

  3. 使用来自同一物种的多个抗体;

  4. 需要缩短实验时间。



4AF647R抗体标记试剂盒(产品编号APL008)


四正柏4AF647R抗体标记试剂盒(产品编号APL008)其组成包含快速标记抗体的全部所需组分。每个试剂盒可完成一次标记,每次可标记50-100μg抗体。

将抗体和荧光染料简单混合于试剂盒提供的反应缓冲溶液中,进行短时间的孵育(30min)。

标记结束后不需终止反应,无需进一步纯化步骤。

标记前需根据表1核对抗体与标记体系的兼容性,来选择是否先进行超滤,或直接进行抗体标记步骤。


(表一)抗体标记步骤参考指南

根据表1可知,标记抗体溶液可以兼容叠氮钠、低浓度的甘油、Tris、 甘氨酸、低浓度的BSA和明胶。

对于不兼容的小分子抗体稳定剂,需要用试剂盒里提供的微型超滤离心管在标记前快速去除,超滤膜截留的分子量为10万。

因此,小于10 kDa的组分通过膜,大于10KDa的分子,包括IgG被保留在膜上,用PBS稀释至试剂盒指定的浓度,转移到新的离心管备用。


接下来简单阐述下4AF647R 荧光抗体标记试剂盒操作步骤:

  1. 准备待标记抗体,最佳浓度是0.5-1mg/ml

  2. 将反应溶液和抗体以1:10比例混合,充分混匀

  3. 将上述溶液混合物转移至染料瓶,涡旋,室温孵育30min

  4. 用抗体储存溶液稀释孵育后的抗体,待用。标记抗体的浓度等于起始抗体标记的数量除以总体积。标记后的抗体储存于4℃,至少可稳定保存6个月

微型超滤离心管组分


·产品特点/优势

  1. 一步标记法,反应结束后无需纯化,操作方便,节省时间;

  2. 抗体回收率达100%,标记效果好,染色效果佳;

  3. 为共价标记,在多色实验中,不会发生抗体间的染料转移现象;

  4. 标记抗体检测通道匹配大多数实验室的流式细胞仪,实用性广;

  5. 与相同荧光标记的同类试剂盒相比,性价比高。

标记抗体染色图

图例:

本试剂盒标记抗CD3抗体的染色效果。

显示标记抗体能够将人外周CD3阳性细胞与阴性细胞清晰分群,且有较强的荧光信号。提示本试剂盒标记效果佳。


·Q&A

第一次使用我们的4AF647R荧光抗体标记试剂盒,也许会遇到一些问题,我们汇总了常见问题及其解答:

  1. 使用偶联试剂盒前是否需要纯化抗体?
    如果抗体能够达到试剂盒要求的纯度即不需再次纯化。

  2. BSA或明胶是否影响抗体标记?

    浓度不超过0.1% 的 BSA和明胶对化学偶联的影响很小。

  3. 抗体会形成高分子量聚集体吗?

    在试剂盒建议的浓度范围内不会。

  4. 抗体浓度是否影响标记效率

    试剂盒有推荐的最佳抗体浓度,您可通过浓缩或稀释使抗体达到合适的浓度范围,以便获得较好的标记效果。

  5. 4AF647R可用于标记IgG以外的蛋白质吗?

    该试剂盒是针对IgG抗体标记优化设计的,不建议标记其他蛋白质。4AF647R标记条件可能导致 IgM 抗体变性。

  6. 4AF647R可用于多色免疫标记吗?不同染料间是否会反生荧光染料的转移?

    可以的,此标记为共价标记,不会发生荧光染料的转移。

  7. 用标记二抗的间接标记相比,直接标记抗体有哪些优势?

    直接免疫荧光染色操作简单,免去了二抗孵育和洗涤的步骤,允许来自同一物种的多个抗体同时孵育,避免了抗体的交叉反应,减少了实验的复杂性;且可以节约经费。

  8. 该试剂盒可以标记天然抗血清或杂交瘤细胞株培养上清液吗?

    不可以,因为这些样本非抗体蛋白含量过高,而抗体含量低。

  9. 实验结束后,有未标记上的游离荧光染料是否对后续实验有影响?
    我们的染料、缓冲液组分以及优化的实验步骤已经完美地解决了这个问题,不会导致非特异性染色,无需担心。

  10. 对于小鼠来源的样本,可以用该试剂盒标记的抗体检测吗?

    本试剂盒可以标记源于不同种属的抗体,但检测的目的抗原需要针对该抗原(包括种属)的特异性抗体。如检测人样本的抗CD3抗体,用于标记的CD3抗体应该来源于小鼠或大鼠。



·四正柏提供抗体标记试剂盒产品列表


产品编号

产品名称

规格

APL001

R-PE-Antibody conjugation Kit / R-PE 抗体标记试剂盆

100/2*100/500/2*500ug

APL002

APC-Antibody conjugation Kit / A PC 抗体标记试剂盒

100/2*100/500/2*500ug

APL003

PE-Cy5-Antibody conjugation Kit / PE-Cy5 抗体标记试剂盒

100/2*100/500/2*500ug

APL004

PerCP-Antibody conjugation Kit / PerCP 抗体标记试剂盒

100/2*100/500/2*500ug

APL008

4AF647R-Antibody conjugation Kit /4AF647R 抗体标记试剂盒

20/100ug

APL005

4AF488-Antibody conjugation Kit / 4AF488 抗体标记试剂盒

100ug

APL006

4AF405S-Antibody conjugation Kit / 4AF405S 抗体标记试剂盒

100ug

APL007

4AF405M-Antibody conjugation Kit /4AF405M 抗体拆己试剂盒

100ug

APL009

Biotin-Antibody conjugation Kit /Biotin 抗体标记试剂盒

100ug




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