Thermo-值得收藏的T细胞marker指南

谈到T细胞和B细胞免疫分型，还得从它们的发育讲起。来源于造血干细胞，T细胞和B细胞由转录因子、细胞因子、趋化因子和白介素等相互协调发育而来。通常情况在基质细胞和IL-7信号作用下，淋巴样祖细胞表达CD19/B220并历经基因重排成为成熟B细胞，在外界抗原刺激下发生体细胞高频突变而成为能分泌特异性抗体的浆细胞。另一方面，T细胞迁移至胸腺并进行胸腺选择，成为CD4或CD8单阳细胞。CD4单阳细胞在外周免疫器官继续分化为辅助性T细胞（Th1/2/17/等），或调节性T细胞（Treg），精准指挥免疫应答。CD8单阳细胞通过血液循环进入外周免疫器官成为我们常说的杀伤性T细胞，是摧毁感染细胞的强有力武器。

值得一提的是，Naïve T细胞两步活化才能真正发挥作用。TCR和CD3主要负责第一信号，而第二信号共刺激信号使T细胞完全活化。主要由抗原提呈细胞表面刺激分子与T细胞共刺激分子相互作用。免疫检查点包括CD28家族，PD1，CTLA4等，正向或负向增强或调节细胞活化。而由于它们在降低免疫细胞活性的作用，阻断其信号传递成为免疫治疗的思路，而PD1/PDL1就是经典之一。发掘新的免疫调节靶点也是当下关注的热点之一。

表1. T细胞和B细胞免疫分型部分靶点和抗体

图1. 免疫荧光分析EL4细胞的CD3。EL4细胞固定破膜后，使用CD3单克隆抗体（货号#14-0032-81）和羊抗大鼠 Alexa Fluor 488二抗（货号#A11006，1:2000稀释度）标记，ProLong™ Diamond 抗淬灭封片剂（含 DAPI，货号#P36962）处理后60X成像分析。

图2. 流式细胞术分析人外周血样本。使用CD8a PE（货#12-0088-42）、CD3 APC（货号#17-0037-42）和CD4 PerCP-Cy5.5（货号#45-0042-82）标记能明显区分细胞群。

图3. 免疫荧光分析Ramos细胞的CD19。细胞固定破膜后，使用CD19单克隆抗体（货号#14-0032-81）和羊抗大鼠 Alexa Fluor 488二抗（货号#A11006，1:2000稀释度）标记。ProLong™ Diamond 抗淬灭封片剂（含 DAPI，货号#P36962）处理后60X成像分析。

说完标志物，T细胞和B细胞的发育和成熟也离不开细胞因子、趋化因子、白细胞介素、干扰素和其他生长因子的协同作用。“小身材大能量”说的就是这些家伙，它们是免疫反应的中坚力量、信息的传递者、功能的执行者，能刺激炎症反应并参与病原体清除。通常通过自分泌，旁分泌等方式“交流”，以下列举一些生长因子与及抗体检测结果：

图4. LPS诱导U-937，THP-1和RAW 264.7细胞表达TNF，使用TNF多克隆抗体（货号#PA5-19810）和驴抗兔 Alexa Fluor Plus 488（货号#A32790，1:2500稀释度）标记。

图5.对THP-1细胞 转染SiRNA沉默TGF-β1蛋白后，诱导其想M2分化。最后用TGF-β1单克隆抗体（货号#MA515065）WB检测其敲除效率。