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新型亲和分子纯化外泌体 二维码
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发表时间:2016-04-20 11:40作者:诺扬生物 新型亲和分子纯化外泌体 MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS ◆案例・应用 1. 从人血清中提取外泌体的产量比较 使用该试剂盒,超滤和表面抗原的抗体亲和纯化的方法提取人血清样品的外泌体,接着中CD9和CD63抗体进行免疫印迹实验进行检测。
2. 常规沉淀方法的比较 来自K562(人慢性粒细胞白血病(CML))细胞培养上清(无血清培养基,或者10% 外泌体缺失FBS补充培养基)用该试剂盒、超滤和多聚物沉淀方法纯化外泌体的产量和纯度比较。 MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS 离心(10,000 ×g ,30分钟),从1mL预处理的K562细胞培养上清(无血清培养基或者10%外泌体缺失FBS补充培养基)收集外泌体(根据试剂盒操作流程,反应时间:3小时) 超滤 离心(10,000 ×g ,30分钟),10mL预处理的K562细胞培养上清(无血清培养基或者10%外泌体缺失FBS补充培养基)超滤(110,000×g,70分钟)。用TBS重悬沉淀后,重新超滤沉淀的片段回收。 多聚物沉淀 离心(10,000 ×g ,30分钟),从1mL预处理的K562细胞培养上清(无血清培养基或者10%外泌体缺失FBS补充培养基)收集外泌体(根据公司A的实验流程,预计时间:过夜) 2-1. 用NanoSight进行电镜显微镜分析和Nano示踪分析 使用MagCaptureTM、超滤和多聚物沉淀从K562 细胞培养上清(无血清培养基)获得的外泌体片段的颗粒大小用NanoSight LM-10进行鉴定。收集的外泌体片段(2-4 x 1010颗粒)用2%多聚甲醛进行固定,用电镜分析。 2-2. K562细胞培养上清回收量和纯度的比较(无血清培养基) 用MagCaptureTM、超滤和多聚物沉淀从K562 细胞培养上清(无血清培养基)获得样品进行电泳。接着用银染,CD63, Flotilin-2和Lamp-1抗体进行免疫印迹实验。 2-3. 从K562细胞培养上清获得回收率和纯度的比较(用10% FBS-补充) 用MagCaptureTM、超滤和多聚物沉淀三种方法,从K562 细胞培养上清(10% 外泌体-缺失 FBS补充培养基)获得样品进行电泳,用银染方法和CD63、Lamp-1和Flotilin-2抗体进行免疫印迹。同时,收集的样品也进行质谱测定,比较所有鉴定的多肽中来自K562细胞的人来源多肽的百分比(由于添加到细胞培养基的FBS中牛蛋白聚集体是混杂的,所以人来源多肽的比率会下降) 3. 细胞培养上清或者血清的预处理 4. 检测流程
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