新型亲和分子纯化外泌体

新型亲和分子纯化外泌体

MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS

◆案例・应用

1.     从人血清中提取外泌体的产量比较

使用该试剂盒，超滤和表面抗原的抗体亲和纯化的方法提取人血清样品的外泌体，接着中CD9和CD63抗体进行免疫印迹实验进行检测。

2.     常规沉淀方法的比较

来自K562（人慢性粒细胞白血病（CML））细胞培养上清（无血清培养基，或者10% 外泌体缺失FBS补充培养基）用该试剂盒、超滤和多聚物沉淀方法纯化外泌体的产量和纯度比较。

MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS

离心（10,000 ×g ，30分钟），从1mL预处理的K562细胞培养上清（无血清培养基或者10%外泌体缺失FBS补充培养基）收集外泌体（根据试剂盒操作流程，反应时间：3小时）

超滤

离心（10,000 ×g ，30分钟），10mL预处理的K562细胞培养上清（无血清培养基或者10%外泌体缺失FBS补充培养基）超滤（110,000×g，70分钟）。用TBS重悬沉淀后，重新超滤沉淀的片段回收。

多聚物沉淀

离心（10,000 ×g ，30分钟），从1mL预处理的K562细胞培养上清（无血清培养基或者10%外泌体缺失FBS补充培养基）收集外泌体(根据公司A的实验流程，预计时间：过夜)

２-1.   用NanoSight进行电镜显微镜分析和Nano示踪分析

          使用MagCapture^TM、超滤和多聚物沉淀从K562 细胞培养上清（无血清培养基）获得的外泌体片段的颗粒大小用NanoSight LM-10进行鉴定。收集的外泌体片段(2-4 x 10¹⁰颗粒)用2%多聚甲醛进行固定，用电镜分析。

２-2. K562细胞培养上清回收量和纯度的比较（无血清培养基）

      用MagCapture^TM、超滤和多聚物沉淀从K562 细胞培养上清（无血清培养基）获得样品进行电泳。接着用银染，CD63, Flotilin-2和Lamp-1抗体进行免疫印迹实验。

２-3. 从K562细胞培养上清获得回收率和纯度的比较（用10% FBS-补充）

       用MagCapture^TM、超滤和多聚物沉淀三种方法，从K562 细胞培养上清（10% 外泌体-缺失 FBS补充培养基）获得样品进行电泳，用银染方法和CD63、Lamp-1和Flotilin-2抗体进行免疫印迹。同时，收集的样品也进行质谱测定，比较所有鉴定的多肽中来自K562细胞的人来源多肽的百分比（由于添加到细胞培养基的FBS中牛蛋白聚集体是混杂的，所以人来源多肽的比率会下降）

３.     细胞培养上清或者血清的预处理

４.     检测流程