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Thermo：磁性分离“黑科技”再添猛将 为NGS靶标富集保驾护航 二维码
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发表时间：2023-03-02 16:27作者：诺扬生物来源：赛默飞生命科学
一直以来，Dynabeads磁性分离产品为细胞、蛋白、DNA、RNA和其他分子的纯化和分析提供了可靠和可重现的结果。Dynabeads产品所使用的磁性分离技术快速而温和，无需色谱柱或离心，因此可以用于从各种生物样本中捕获感兴趣的靶标，从而被广泛应用于生命科学、生物技术和医疗健康等各种领域。 其中，链霉亲和素磁珠根据粒径大小的不同以及磁珠表面所带的亲疏水性不同，适用的下游应用也有所不同，因此可能需要多次尝试，才能为自己的实验选到合适的磁珠。为了助力科研人员在NGS的靶标富集步骤中获得高质量的靶标序列，用于靶标富集的Invitrogen™ Dynabeads™链霉亲和素磁珠诞生了！多年来，Dynabeads产品一直被大型NGS公司如Illumina、Agilent和Ion Torrent等品牌推荐用于这一步骤。对于没有计划购买即用型文库或包含磁珠的靶标富集试剂盒的科研人员来说，用于靶标富集的单独Dynabeads链霉亲和素磁珠则是一个非常棒的选择。 Dynabeads链霉亲和素磁珠（用于靶标富集）可提供：
NGS工作流程和靶标富集步骤  图1. NGS工作流程  图2. 靶标富集步骤 图1显示了NGS工作流程的主要步骤。 图2则简单展示了靶标富集步骤是如何完成的。杂交可以在基于磁珠的靶标富集步骤之前进行（间接杂交捕获技术），也可以在生物素化探针与 Dynabeads 磁珠结合之后进行（直接杂交技术）。 出色性能可不是随便说说的，当然得靠数据来证明。下图则显示了Dynabeads 链霉亲和素磁珠（用于靶标富集）（红色）、阳性对照和来自其他供应商的链霉亲和素磁珠的终文库 [nM] 平均浓度（图3）。  图3. 终文库的浓度比较。所有样品一式三份进行制备 (n=3)。根据文库片段的浓度和大小分布计算终文库的浓度。对于下游外显子组测序，质控标准设置为 2.5 nM。 从图片上可以看出， Dynabeads 链霉亲和素磁珠（用于靶标富集）的性能远高于质控标准。与其他供应商的磁珠相比，Dynabeads 磁珠具有出色表现。 我们又将达到上图中靶标富集浓度质控标准的几个样品进一步做了测序覆盖度的分析，分别为：Dynabeads 链霉亲和素磁珠（用于靶标富集）（红色）、阳性对照以及来自其他供应商的链霉亲和素磁珠（图4）。可以看出，使用 Dynabeads链霉亲和素磁珠进行靶标富集，提供了相当好的覆盖度。  图4. 测序覆盖度。平均覆盖度表示为三次重复实验的平均值，所有样品一式三份进行制备（n = 3）。 另外，我们还对达到图3中靶标富集浓度质控标准的几个样品做了测序深度的分析（图5）。Dynabeads链霉亲和素磁珠（用于靶标富集）在测序深度为60X时，97.53%的靶标序列被至少测序60次。这一性能对于临床应用以及需要较高测序深度（例如 60 倍）的罕见变异研究则是必不可少的。  图5. 平均测序深度 新品推荐  Dynabeads链霉亲和素磁珠（用于靶标富集）
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