富士胶片和光生物：CUBIC组织透明化试剂——应用实例更新

CUBIC Trial Kit是一款用于透明化技术CUBIC（Clear, Unobstructed Brain/Body Imaging Cocktails and Computational analysis）的试剂盒。

该方法由上田泰己教授和洲崎悦生教授等人开发。

只需将组织浸入试剂盒包含的溶液中，即可对小鼠大脑和全组织、灵长类的全脑和甲壳类的全组织进行透明化处理和折射率调整。

该方法有望应用于病理学研究和单细胞水平中的观察。

数据提供：

国立研究开发法人理化学研究所上田泰己教授、洲崎悦生教授

◆CUBIC特点

● 操作简单（只需浸入溶液）

● 可透明化整个器官

● 小鼠全脑透明化只需两周

可进行透明化的组织

小鼠大脑和全组织，灵长类全脑，鱼类、甲壳类、甲虫等的全组织，骨骼（需进行脱钙处理）

CUBIC Trial Kit试剂盒组成

1. ScaleCUBIC-1 Solution——250 mL x 1支

2. ScaleCUBIC-2 Solution——250 mL x 1支

3. Mounting Solution-1——40 mL x 1支

4. Mounting Solution-2——40 mL x 1支

透明化处理需准备

▼ 试剂：

1. CUBIC Trial Kit

2. 多聚甲醛（产品编号：160-16061）

3. PBS×1（产品编号：164-25511）

▼ 实验用具：

1. 5 mL/15 mL/30 mL/50 mL锥形管（配合样品使用）

2. 摇床

3. 用于观察CUBIC透明化样品的荧光显微镜※和推荐物镜※※

※共聚焦显微镜、双光子显微镜、光片显微镜

※※与折射率 (RI=1.49)相匹配的物镜。

建议在使用之前咨询显微镜制造商。

◆CUBIC实验方案事例

透明化实验方案示例（完整器官）

请注意，组织透明化实验方案中所用试剂用量、处理时间需根据样品尺寸进行调整。此外，建议在灌注固定后，取出并重新固定样品。

各个步骤中使用的试剂量约为12-15 mL，清洗时建议使用试剂量的5-10倍。

*每2天更换新溶液

**建议以2 : 8、3：7的比例混合 (RI = ～1.49) 试剂盒中的Mouting Solution 1 和 2 使用

免疫组织染色实验方案示例

脑组织块的免疫染色案例，详细实验方案请见参考文献（1）

*每2天更换新溶液

**分别用以下溶液稀释抗体

一抗：0.1% (v/v) Triton X-100, 0.5% (w/v) bovine serum albumin, 0.01% (w/v) sodium azide in PBS

二抗：0.1% (v/v) Triton X-100, 0.1% (w/v) bovine serum albumin, 0.01% (w/v) sodium azide in PBS

***建议以2 : 8、3：7的比例混合 (RI = ～1.49) 试剂盒中的Mouting Solution 1 和 2 使用。

◆CUBIC应用案例

鱼类透明化案例

数据提供：东京海洋大学 海洋生物资源学院 二见邦彦老师

图3．使用CUBIC的鱼类透明化案例

图4．使用CUBIC处理后的鱼类内脏切片案例

甲壳类（螃蟹·鼠妇）透明化案例

数据提供：浜松医科大学 医学分光应用寄附研究生 绀野在老师，冈崎茂俊老师

甲虫（金龟子、独角仙、锹形虫）透明化案例

数据提供：东京大学大学院 理学系研究科生物科学专业 黑田真也老师

甲虫透明化需经过固定、漂白和透明化处理。

小鼠全脑血管网络可视化案例

数据提供：Miyawaki, T. et al. : Nat Commun., 27, 11(2020).

※ 仅供实验研究用，不可用于临床诊断。