细胞培养中培养基你还困惑吗？注意这些就够了！

细胞培养基是细胞培养中不可缺少的营养成分，但是最基础的培养基却给很多实验者带来了一系列的问题。如果细胞状态不好，后续试验将无法进行，甚至前功尽弃。

   培养基常见问题   

一、如何选用培养基?   选择培养基没有一定标准，有几点建议可供参考：

1. 建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基。可以查阅文献，或在购买细胞株时咨询。

2. 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选1640；进行细胞杂交、基因转移实验，可选择IMDM。

3. 用多种培养基培养目的细胞，观察其生长状态，可以用生长曲线、集落形成率等指标判断，根据实验结果选择最佳培养基，这是最客观的方法，但比较繁琐。

4.ATCC（American Type Culture Collection）收集了绝大多数细胞的详细资料。打开ATCC网页的Cells and hybridomas链接，输入细胞名称就可以搜索ATCC的细胞数据库。数据库中有每一种细胞的详细描述，包括细胞的来源，培养和冻存条件，以及相关文献等资料。

二、液体培养基可以放-20℃保存吗？

不可以！因为在-20℃下，培养基中的盐容易析出，培养基融化后，有的盐可能无法重新溶解，从而导致培养基渗透压降低，培养细胞时，细胞容易破裂而死亡。   

三、新配制的液体培养基能保存多久？

我们建议将新配制的培养基放置于4℃，避光保存尽量在一周内使用完毕。培养基越新鲜越好。

四、培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？

一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

五、培养基中是否须添加抗生素？

除了特殊筛选系统外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。

为防止细菌、真菌污染，可以加入青霉素-链霉素双抗溶液，其培养基中的终浓度为青霉素100U/ml，链霉素为100ug/ml。   

六、为何培养基保存于4℃冰箱中，颜色会偏暗红色，且pH值越来越偏碱性？

培养基保存于4℃冰箱中， 培养基内之CO₂ 会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中之酸碱指示剂（通常为phenol red）的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果， 将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时， 可以通入无菌过滤之CO₂， 以调整pH 值。

七、培养液pH是怎样影响细胞生长的？

由于大多数细胞适宜PH值为7.2-7.4，偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对PH值要求也不完全相同，原代细胞培养一般对PH值变动耐受差，无限细胞系耐受力强。 但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些，偏酸环境中更有利于细胞的生长。因此，配制培养用液时可把液体的PH值稍微调的偏酸一些。液体在经过0.1um或0.2um滤膜过滤时，PH值会向上浮动0.2左右。

八、为什么液体培养基1640颜色发黄，是pH值不对吗？

不是。因为配方原因，1640为碱酚红型，其中酚红的浓度只有DMEM的四分之一，所以是因为酚红浓度低，而非PH值低。

九、为什么有客户要求培养基中不含酚红？

研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，细胞培养，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加酚红的培养基。

十、放置在冰箱中的培养基颜色会发生变化，为什么？

培养基保存于4℃冰箱中，培养基内CO₂会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中酸碱指示剂（通常为phenol red）的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱后再用于细胞培养将造成细胞生长停滞或死亡。培养基偏碱时，可以通入无菌过滤的CO₂，以调整pH值。

十一、无血清培养与有血清培养使用的抗生素量一样吗？

当在无血清培养基中添加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。因为血清中的蛋白会结合和灭活一些抗生素。而在无血清培养条件下，抗生素不被灭活。

十二、培养基各个成分的作用有哪些？

1.NaHCO₃的作用是什么？

与二氧化碳一起形成缓冲系统，保持培养基PH值稳定。

2.丙酮酸钠的作用是什么？

丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。丙酮酸钠的贮存液浓度一般为50mM，-20℃保存，培养基中的终浓度为1mM.

3.加入HEPES有何好处？

培养基中最常用的Buffer system是碳酸氢盐，它可提供营养，但却在生理PH值条件下会降低缓冲能力。而HEPES是一种很强的Buffer，加入HEPES能使细胞培养基在PH7.2-7.6条件下缓冲能力增强。HEPES的贮存液浓度一般为1M，常温保存。培养基中的终浓度为25mM，即5ml 1M的HEPES加入到200ml完全培养基中。

4.酚红的作用是什么？

酚红在培养基中被用来作为PH值指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。

5.谷氨酰胺的作用是什么？

几乎所有的细胞对谷氨酰胺都有较高的要求。谷氨酰胺脱掉氨基后，可作为培养细胞的能量来源，参与蛋白质的合成和能量代谢。在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。

谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20℃冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4度冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。

试验操作中常配制高浓度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支），分装使用，-20℃保存。使用时，每支1ml的谷氨酰胺加入到99ml完全培养基中，使其终浓度为2mM培养基。

   赛澳美简介   

赛澳美细胞技术（北京）有限公司作为生命科学领域专业系统供应商，致力于为干细胞、免疫细胞治疗、疫苗、抗体蛋白及动物细胞工程等基础及应用领域提供一体化解决方案。主要产品为胎牛血清、细胞培养基、胰酶、单抗等全套细胞培养基质材料。

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细胞培养基是人工模拟细胞在体内生长的营养环境，是提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。

被广泛应用于细胞生物学科和医学研究的各个领域，如疫苗生产、基因药物生产、临床用单抗等。

DMEM是由Dulbecco改良的Eagle培养基，起初是为小鼠成纤维细胞设计的。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，采用双倍的HCO₃-和CO₂浓度起到更好的缓冲作用。

低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。高糖更适合高密度悬浮细胞培养，也适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。例如CHO细胞表达生产乙肝疫苗、CHO细胞表达EPO。

Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制，针对淋巴细胞培养设计，含BSS＋21种氨基酸＋维生素11种等。现也用于悬浮细胞培养，如哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。

Ham's F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的，现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM等体积混合使用，得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物，这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。由于营养成分丰富，且可以使用较少血清，故也常作为无血清培养基的基础培养基。

1950年Morgan等设计的具有确定化学成分的细胞培养液，即M-199。除BSS外，含有53种成分，为全面培养基，主要用于鸡胚成纤维细胞培养。此培养液必须辅以血清才能支持长期培养。M-199可用于培养多种种属来源的细胞，并能培养转染的细胞。现广泛用于病毒学、疫苗生产。