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Cellmax澳洲胎牛血清批次715质检报告及详细操作指令

发布时间:2016-02-22

  CellMax 是兰州民海生物工程有限公司(子公司百灵生物)旗下的高端胎牛血清品牌,公司由美国Hyclone实验室公司和西北民族大学于2000年9月组建的合资企业,2014年7月合资期限到期转为股份制内资企业 。


质检报告一例。如需要,共有9个批次血清的记录可供查询。

以下是CellMax胎牛血清质检项目和实验方法简介,还包括生产过程中每一步操作指令记录。如需要,可提供质检报告原始文件。文中提供CellMax澳洲血清(715批次)质检报告扫描图作为案例.


产品质检标准(必检项目)

名称:胎牛血清(FBS)级别胎牛血清
Superfine
编号SA10
检测项目及方法标准要求
外观检查:目测法

浅黄色澄清稍粘稠的液体,无溶

血或异物

pH:pH计7.00~8.00
蛋白质含量 %(g/ml) :  Lowry法3.0~4.5
细菌内毒素(Eu/ml):凝胶法<10
血红蛋白含量(mg/dl):分光光度法<30 
渗透压摩尔浓度 (mOsmol/kg):冰点法280~360
无菌检查: 薄膜过滤法---细菌、真菌(美国药典)阴性
支原体:培养法及DNA荧光染色法阴性
病毒检测(9CFR  113.53)
荧光抗体法:牛病毒性腹泻病毒、牛腺病毒、牛细小病毒、呼肠孤病毒、狂犬病毒、 牛副流感病毒3型、蓝舌病毒、牛呼吸道合胞体病毒
均为阴性
细胞培养法:致细胞病变因子、致红细胞吸附因子均为阴性
牛免疫球蛋白IgG含量<500mg/L
生长曲线CHO细胞、VERO细胞、MRC-5细胞接种浓度分别按3×103细胞/mL、6×103细胞/mL、1×104细胞/mL,每24h计数,绘制生长曲线。

倍增时间不得低于对照标准品倍增时

间的90%。

 
贴壁率V79细胞
CHO-K1细胞
≥ 70 %
≥ 60 %
贴壁细胞培养VERO细胞、CHO-K1细胞、MRC-5细胞

体外连续培养5代,每代48小时均能形成

致密单层,且形态正常。

 
能用该级别血清培养的细胞种类
 

间充质干细胞、造血干细胞,以及其他绝大多数常用的原代细胞(淋

巴细胞、内皮细胞、肌肉细胞、成纤维细胞、神经细胞)、基因改造

细胞(杂交瘤细胞)、肿瘤细胞、异倍体细胞。

非必检项目(《中国药典》未做要求,检测项目的结果作为参考信息)

生化分析
项目单位项目单位
碱性磷酸酶U/L甘油三酯mmol/ml
胆固醇mmol/ml总胆红素umol/ml
肌酐umol/ml尿素mmol/ml
葡萄糖mmol/ml尿酸umol/ml
谷草转氨酶U/L
ng/ml
谷丙转氨酶U/L睾酮ng/ml
乳酸脱氢酶U/L


微量元素


项目单位项目单位
mmol/Lmmol/L
mmol/L总铁结合力umol/ml
mmol/L

mmol/L

无机磷mmol/L

蛋白电泳: 白蛋白、alpha-1、alpha-2、beta、gamma
细胞培养:胚胎干细胞、人间充质细胞、人乳腺癌细胞



蛋白质含量测定(Lowry 法)记录
操作步骤
1、取标准蛋白质溶液(1 00μg / ml) 0.2m l 、0 . 4ml 、O. 6ml 、O. 8ml 、1. Om l分别置于试管中,用0.85%NaCL 溶液补足至1. Oml.取供试品(用生理盐水1: 500 稀释) 1. Oml 于试管中。以上各管平行3份;再另取一支试管加入1. Oml O. 85% NaCL溶液作为空白管,按顺序向各管中加入5.0mlFolin-酣甲试剂,混匀。室温下静置10min 后, 再依次向各管加入0.5 ml Folin-酚乙试剂,立即摇匀, 于37 士1℃恒温放置30min。
2. 用650nm 波长比色。以标准蛋白溶液的浓度为横坐标、吸光值为纵坐标,绘制标准曲线,并计算回归方程和相关系数(R)。将供试品吸光值代入回归方程求蛋白质含量。


细菌内毒素检测记录-凝胶法
方法依据《中国药典》第三部
试剂:鲎试剂、细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素检查用水.
在内毒素10EU/ml情况下检测血清样品,结果为阴性,证明该血清内毒素小于10EU/ml.


血红蛋白(Hb)含量测定记录
操作步骤
          标准溶液管ml    供试品管ml     空白管ml
1.纯化水;.                                                   0.02ml
2.血红蛋白标准浴液: 0.02
3. 供试品:                                 0 .02
4. 邻联甲苯胶:    1. 0                     1. 0                1. 0
5. 1. 0% 过氧化氢溶液: 1. 0                1. 0                1. 0
放置10min,放入10 % 冰乙酸
6. 10% 乙酸济液:  10.0                      10.0               10.0
各管混匀后,于室温下静置 10min , 在λ=435nm 处,以空白管调零,测定各管的吸光值。
计算公式: HB 含量:=As/Aa X O. 02% (g/ml).



渗透压摩尔浓度测定记录
检验依据:现行《中华人民共和国药典》三部
检验操作:
1. 仪器使用前用300mO smol/Kg 校准液测试一次,若偏差超出土1%需校正.
2. 用取样器取供试品80ul,注入测试管中〈确保其中无可见气泡) •
3 将测试管推入支撑座至"停止"位置,使测温探头完全浸入测试管内供试晶中.
4 按下己放置好的手柄,仪器屏自动显示当前温度,温度降到零下6 度左右时探针会自动插入离心管,显示屏显示测量后数据:冰点值和摩尔浓度值.该值即为供试品冰点值和摩尔浓度值。
5 测试结束后,将移动手柄上移,取下测试管,用纯水对测温探头和探针进行清洗,再使用滤纸将测温探头擦拭干后放回原位,关闭仪器电源。



无菌检查记录
试剂:改良马丁培养基、硫酸盐醇培养基、0.1%蛋白胨水溶液、阳性菌、集菌器



口腔支原体检查记录——液体培养法
标准菌株:口腔支原体   atcc
观察供试品、阴性对照、阳性对照4到21天原代培养、次代培养(3者均分别用肉汤培养基、半流体培养基培养)的生长情况,看有无支原体
供试品和阴性对照均始终无支原体生长,阳性对照在4到21天原代培养、次代培养均由支原体生长



肺炎支原体检查记录一液体培养法
肺炎支原体     来源atcc
方法同口腔支原体



支原体检查记录——DNA 染色法
①用含8%供试品的培养液, 培养Vero 细胞, 第3 代细胞生长至50% --75%时,进行染色。
②吸山培养液,用固定液固定后, 加入Hoec h st 33258 染色工作液,室温下染色30 mi n , 以无菌0. 9% NaC l 浴液洗涤3 次, 在荧光显做镜干,以UV 激发光点(330-380 nm) 之滤光镜观察。
判定标准
在荧光显微镜下如除细胞核外, 核周围及细胞表面出现蓝色荧光小点或是丝网状点,表示示所测样本有支原体的污染, 即判为阳性( + );若只观察到细胞核,而无其他荧光物山现,表示测试样品没有支原体的污染,即判为阴性( - ) ,只有在阴阳性对照都成立时才能对供试品进行判断。



支持细胞增殖检查记录一贴壁率测定
贴壁率的测定:
按有限稀释法将细胞稀秤,并按每2 -50 个/cm2 细胞的浓度接种于60mm 细胞培养皿, 于37度 、5%二氧化碳条件下培养1 -3 周后。出现集落后, 继续培养4 天左右, 用PBS 清洗细胞,用无水甲醇同定l Om i n , 弃去甲醉, 加入结晶紫染液染色10m i n, 弃去染液。
贴壁率= (所形成集落数/接种细胞数) X 100%




细胞生长曲线、倍增时间测定记录
1. 细胞生长曲线的测定: 取供试品按10%浓度配制细胞培养液, 按每1 m 1 含3X 1 03个细胞的细胞浓度接种至24孔板中,每天计数活细胞,连续观察10 天,并绘制生长曲线。
 
2. 细胞倍增时间的测定: 按CHO-K 1 细胞生长曲线计算细胞的倍增时间。取细胞峰值前一天的细胞计数( Y ) 、接种细胞数(x)、及生长时间(T)计算。
A=log2Y/X             倍增时间=T/A



致细胞病变/血吸附因子检查记录
试剂: 
1. 0.5 %鸡和豚鼠红细胞混合悬液
2. 无钙镇离子的PBS 溶液
将细胞连续培养三代,每代培养至第七天,无病变则为阴性。




病毒检查记录——直接免疫荧光抗体法
用供试品培养细胞两代,与阴阳性对照比较,无病毒感染,则为病毒阴性。



有详细批生产记录、滤芯完整性检测记录、操作指令记录、清场记录等可查询


批生产记录目录
批生产指令
血清解冻记录
清场记录
预过滤记录
清场记录
灌装记录
清场记录
包装指令
包装记录
清场记录
批物料平衡检查汇总表
滤芯完整性检查记录
批生产材料高压灭菌记录
过滤灌装系统清洁记录
血清灭活记录
烤瓶记录
偏差处理记录
成品放行审核记录

成品审核放行单



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