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Bioss|Western blot内参抗体选择攻略大全

发布时间:2019-05-22

内参的重要性

Western Blot除了能证明某样品中含有某种蛋白之外,其最为重要的作用是比较不同条件下或者不同组织中,目的蛋白表达量的相对多少——即为蛋白表达水平最直接的证据。要衡量蛋白的表达水平,前提条件就是等量的上样量。内参的意义就是保证上样量的一致。


内参即是内部参照(Internal Control),对于哺乳动物细胞来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins),它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。


选择内参抗体应遵循的原则

样本来源

哺乳动物的组织或细胞:β-Actin、β-Tubulin、GAPDH、Lamin B1、PCNA 等; 

植物样本:plant actin、Rubisco 等;

其他来源样本,应参照已发表文献,选择合适蛋白作为内参。

目的蛋白定位

全细胞蛋白和细胞质:β-Actin、beta Tubulin、GAPDH 等; 

细胞核蛋白:PCNA、LaminA、LaminB、HistoneH3,K70、K80、Erk2、TATAbindingprotein(TBP)以及c-Jun、c-Fos等;

胞膜蛋白:Na(+)/K(+) ATPase 等;

线粒体蛋白:VDAC1、COXIV等;

血清:Transferrin等。

目的蛋白分子量

目的蛋白分子量最好能与内参蛋白分子量相差 5kd 以上,各内参蛋白分子量详见下方汇总表。

Tips

内参的选择还需要考虑实际的试验环境:

在做多组织多细胞样本对比表达量时,最好选用 GAPDH作为内参,因为GAPDH是代谢类蛋白,在活组织中表达比较恒定。而β-Actin和β-Tubulin是结构蛋白,不同组织的细胞结构会有差异性;

而在某些细胞中,由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高,不适合做内参;

涉及细胞增殖的相关试验中,c-Jun由于自身表达变化不适合做内参;

凋亡实验时,TBP、Lamin等也不适合作为内参;

做诱导后样本或检测磷酸化等修饰性抗体时,应选择结构蛋白作为内参,如β-Actin和β-Tubulin。

做各种分泌液样本的时候,如血浆、乳汁、组织液等,由于没有完整的细胞结构,只能选择一些分泌蛋白作为内参。

 设计实验方案的时候应该考虑实际的实验因素并查询相应文献,在实验过程中也应该注意内参表达是否出现异常。


Western Blot内参抗体选择汇总表



kDa

Whole Cell/Cytoplasmic
(全细胞/胞浆)

Nuclear(核)

Mitochondrial
(线粒体)

Cytoskeletal
(细胞骨架)

Plasma Membrane
(细胞膜)

Serum&Extra-cellular Fluids
(血清和细胞外液)

135





Cadherin


124

Vinculin



Vinculin



116


PARP





100




α-Actinin

NaK-ATPase


90

HSP 90






89


PARP





85





CD71


77






Transferrin

74


Lamin A/C





70

HSP 70






68


Lamin B1





63


Lamin A/C





62


HDAC 1





60

HSP 60


HSP 60




52




α-Tubulin



45

MEK1/2

Lamin B1


β-Actin



38


TBP





37

GAPDH






36


PCNA





35




β-Tubulin



34



VDAC/Porin




24





Caveolin-1


21





Caveolin-1


19




Cofilin



17


Histone H3

COX IV




9




Profilin 1



5




Profilin 1

   
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                   
                                                                                         
Western Blot内参抗体精品推荐

产品编号

英文名称

中文名称

分子量

稀释度

规格

价格

bs-0061R

β-actin

β-肌动蛋白抗体

42kDa

1:5000-20000

20ul

¥480

50ul

¥680

100ul

¥980

200ul

¥1780

bsm-33036M

β-actin

β-肌动蛋白单克隆抗体

42kDa

1:5000-20000

50ul

¥680

100ul

¥980

200ul

¥1780

bsm-33128M

Plant actin

植物肌动蛋白抗体

43kDa

1:5000-20000

50ul

¥680

100ul

¥980

200ul

¥1780

bs-10196R

α-SMA

肌动蛋白α抗体

42kDa

1:5000-20000

20ul

¥480

50ul

¥680

100ul

¥980

200ul

¥1780

bsm-33187M

α-SMA

肌动蛋白α抗体

42kDa

1:5000-20000

50ul

¥680

100ul

¥980

200ul

¥1780

bsm-0978M

GAPDH(3E12)

3-磷酸甘油醛脱氢酶
单克隆抗体

38kDa

1:1000-5000

20ul

¥480

50ul

¥680

100ul

¥980

200ul

¥1780

bsm-33033M

GAPDH(4F8)

3-磷酸甘油醛脱氢酶
单克隆抗体

38kDa

1:1000-5000

50ul

¥680

100ul

¥980

200ul

¥1780

bs-4511R

β-tubulin

微管蛋白βtubulin抗体

55kDa

1:1000-5000

20ul

¥480

50ul

¥680

100ul

¥980

200ul

¥1780

bsm-33034M

β-tubulin

微管蛋白βtubulin单克隆抗体

55kDa

1:5000-20000

50ul

¥680

100ul

¥980

200ul

1780

bsm-33041M

beta I Tubulin

微管蛋白β1单克隆抗体

50kDa

1:5000-20000

50ul

¥680

100ul

¥980

200ul

¥1780

                                                                                                                              
(点击查看Western Blot内参抗体目录)

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