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MiRNA纯化与检测产品专题

发布时间:2016-10-11

▶背景介绍


       microRNA(miRNA)是一种机体内源性表达的单链小分子RNA,位于基因组非编码区,本身不具有开放阅读框(open reading frame,ORF),具有高度保守性,时序性和组织特异性。miRNA广泛存在于各种真核细胞中,不编码任何蛋白质,长度仅为20~24nt。成熟的miRNA 5′端有一个磷酸基团,3′端为羟基,由具有发夹状结构的约70~90nt的单链RNA前体经过Dicer酶加工后形成。成熟的miRNA形成RNA诱导的基因沉默复合体(RNA-induced silencing complex,RISC)作用于靶点mRNA,通过对mRNA剪切或抑制其翻译过程而调控基因的表达。目前人们还不明确miRNA及其靶mRNA之间的作用机制。


       检测miRNA目前常用荧光定量方法检测,根据反转录的不同分为A法和颈环法。


▶实验流程

RNA提取(MiRNA提取)---反转录----定量PCR

▶专题列表


Ⅰ. 加A法 MiRNA纯化与检测产品专题


产地/品牌货号品名规格价格
康为CW0627SmiRNA提取试剂盒50次¥998
康为CW2141SmiRNA cDNA第一链合成试剂盒 25次¥1,598
康为CW2142SmiRNA荧光定量PCR检测试剂盒125次¥598

MIRNA提取

miRNA提取试剂盒   miRNA Purification Kit


       miRNA提取试剂盒专用于从各种动物组织、 植物组织、 细胞、 血清、 血浆等样本中分离纯化miRNA, 还可以提取siRNA,snRNA等其他小于200nt的小分子RNA,同时也可用于总RNA的提取。本品将酚/胍裂解技术和硅基质膜纯化技术相结合,独特的裂解液在有效抑制RNases的同时,可以通过有机抽提的方法除去细胞或组织样品中的大部分DNA和蛋白。对于一些敏感的下游实验中,如需富集miRNA可适用该试剂盒单独对miRNA进行富集。本品适用样本范围广,制备的RNA纯度高,可直接用于敏感的下游应用,如Northern Blot分析,Real-Time PCR,Microarray Analysis等。


反转录

miRNA cDNA第一链合成试剂盒  miRNA cDNA Synthesis Kit


       本试剂盒采用在miRNA 3’末端加多聚A尾的方法来使miRNA具有Poly(A)尾,之后再使用Oligo(dT)-Universal tag通用逆转录引物进行逆转录反应,最终合成miRNA对应的第一链cDNA。


  miRNA cDNA第一链合成试剂盒包含miRNA 3’末端Poly(A)尾修饰过程及修饰后逆转录过程需要的全部试剂。该试剂盒具有非常高的Poly(A)修饰和逆转录效率,可以从1 ng-2 μg的total RNA中有效获得miRNA对应的cDNA第一链。并且操作简便、快捷,可以用于从一个反应合成的cDNA中同时检测多种miRNA,不仅减少了误差、节约了样品,同时还实现了检测的高通量。


       备注:本试剂盒须与miRNA荧光定量检测试剂盒(CW2142)配套使用。


       自备实验材料:1 ng-2 μg的总 RNA,或0.1 ng-1 μg的小分子RNA。


PCR检测


miRNA荧光定量PCR检测试剂盒  miRNA qPCR Assay Kit


      本试剂盒包括检测所需的2×miRNA qPCR mix 和Reverse primer.

注:
Forward Primer设计原则,这样就两个引物都解决了。
1.遵循引物设计的最普遍原则。
2.以成熟的miRNA序列为基础,将U替换成T,这是最基础和最简单的设计方法。
3.试剂盒中提供的下游引物的Tm值为63.6℃,设计上游引物的Tm值要尽量保证在   63.6℃左右。
4.若按照原则“2”的方式直接设计的引物其Tm值过低,可以在引物的5’端添加几个碱 基(最好为G或C碱基);也可以在3’端添加1个或几个A碱基;或者5’端和3’端同时修饰。
5.若按照原则“2”的方式直接设计的引物其Tm值过高,可以在引物的5’或3’端去掉几个 碱基。



Ⅱ.  颈环法 MIRNA纯化与检测产品专题


       基于SYBR Green的real-time PCR检测系统,可以从一个反应合成的cDNA中检测多至50种miRNA分子,减少了误差,节约样品。同时结合我们公司开发的一步法PCR检测试剂,可以将反转录和PCR同时进行,实验更为简单,结果更为稳定。

产地/品牌货号品名规格价格
百奥BR0009RISOTM RNA Isolation Reagent
100ml¥600
百奥BK2100EzOmicsTM One-Step qPCR Kit100T(50ul)¥2,000
百奥200T(50ul)¥3,800
百奥BK1010EzOmicsTM miRNA qPCR Detection Primer Set200T询价
百奥BK2200EzOmicsTM SYBR qPCR Kit200T¥600


 RISOTM RNA Isolation Reagent

      产品简介
 
      RISO是一种快捷方便的RNA提取试剂,可从细胞、组织等材料中提取RNA。在样品处理过程中,RISO可完全充分裂解样品,同时保持RNA的完整性。加入氯仿离心后,溶液形成上清层水相、中间层和下层有机相。取上清层,籍异丙醇沉淀回收RNA;中间层用乙醇沉淀可同时回收DNA;有机相可用异丙醇沉淀回收蛋白。

      RISO试剂可用于少量样品 (如活检标本) RNA提取,也可用于大量样品 (如大组织器官) RNA提取。提取RNA整个过程方便快速,可在一个小时内完成,提取的RNA无蛋白和DNA的污染,纯度髙,可直接用于Northern Blotting (RNA印迹分析)、斑点杂交、进一步Poly(A)+ (mRNA) 纯化、体外翻译、RNase保护分析、RT-PCR、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。
 
      主要特点
 
      1. 抗降解能力强:RNA酶 (RNase) 在RISO中快速失活,确保RNA抽提高质、高量,重复性好。
      2. 细胞、组织均适用:适用于各种细胞和标本,对少量组织标本 (如活检标本) 尤其适用。
      3. 操作简捷、省时,即使对初次操作者亦适用。

miRNA Q-PCR引物试剂盒
     
      miRNA常规的检测方法主要有Microarray、Northern Blot、In SituHybridization等基于分子杂交的方法,这些方法敏感度低、耗时长、RNA的用量较大。Biomics开发出基于SYBR Green法的miRNA检测引物,配合反转录试剂和PCR试剂,即可完成对miRNA的精确定量,具有快速、特异性强、灵敏度高等优点。
 
      此试剂盒包含了miRNA特异的逆转录引物,以及qPCR正、反向引物套装。其中茎凸环结构状的miRNA特异逆转录引物可特异性的转录成熟的miRNA。再利用高度特异的正反向引物,使miRNA定量即灵敏又高度特异。试剂盒提供了一种最低能检测到5个拷贝目标miRNA的高灵敏度的检测方法,并且具有一个7 个数量级的动态变化范围,反应的模板可以是总RNA或者已纯化的小RNA等。
 
      Reference
       
Ke Xu, Xin Liang, Daling Cui et al, miR-1915 Inhibits Bcl-2 to Modulate Multidrug Resistance by Increasing Drug-Sensitivity in Human Colorectal Carcinoma Cells,Molecular Carcinogensis. Article first published online : 28 Nov 2011.


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