产品搜索  
     
您现在的位置:首页 > 新闻中心 > 产品专题

siRNA/miRNA专题

发布时间:2016-08-17

     siRNA主要存在于低等生物 可以作用在靶基因的mRNA任何地方 通过降解来抑制表达 一般一条siRNA只针对一个靶基因, 可以通过人为的设计合成siRNA来导入高等生物细胞中诱发抑制作用。

 

     miRNA是低等和高等生物都存在的,作用在靶基因的mRNA 3’UTR区域,通过降解或者抑制翻译来抑制靶基因表达 一条miRNA可以有多个靶基因。可以通过人工合成miRNA mimics(模拟物)和miRNA inhibitor(抑制剂)导入生物细胞中发挥调控作用。

 

百奥迈科介绍


    百奥迈科(Biomics)生物技术有限公司,是由国家“千人计划”专家朱远源博士率领的海归科研、管理团队于2006年在南通经济技术开发区创立,注册资本1212万美元,总投资2500万美元,致力于第三代制药——小核酸药物研发与产业化。

 百奥迈科先后被评为国家博士后科研工作站、国家级高新技术企业、江苏省工程技术研究中心等。2011年,百奥迈科成为“十二五”规划全国唯一的小核酸重大新药创制基地。另外,还承担了多项国家、省、市级科技项目。2013年,百奥迈科获选“2013年亚洲新兴企业”。


一、siRNA系列产品 
普通siRNA oligosiRNA对照RNAi系列合成优惠套餐siRNA载体构建服务
修饰和标记的siRNA oligo 动物实验用siRNA

二、 miRNA 系列产品
miRNA mimicsmiRNA inhibitormiRNA 对照miRNA 过表达质粒构建
miRNA 抑制表达质粒构建miRNA前体(miRNA precusor)动物实验用miRNA修饰和标记的miRNA

 化学合成寡聚核苷酸

        百奥迈科公司配备了国际上最先进的高通量、大规模的核酸合成仪及配套纯化分析仪器,合成规模从μg级到g级,随时为您提供高通量、高质量的各种规模的核酸产品,满足细胞水平药物靶点筛选和动物实验中试或放大的要求。百奥迈科提供的每批核酸产品均经过严格的质量控制,确保产品质量并提供相应的质量报告, 产品特点:


项目描述

质量控制:

oligo合成是在严格控制的流程和条件下完成的,长度和标记经PAGE检测或质谱分析进行控制。产品通过分光光度计进行定量。

碱基:

RNA (A, C, G and U)
DNA (A, C, G and T)
2’-OMe(A, C, G and U)

修饰:

Amine C6 linker、Phosphate 、Cholesterol、2’ -OMe。其他修饰请咨询。

标记:

Cy3、Cy5、FAM、Biotin。其他标记请咨询。

纯化:

彻底脱保护并去除盐分,可根据客户要求选择PAGE、OPC或HPLC纯化。

产品形式:

单链或双链、冻干粉。

储存和稳定性:

推荐样品保存在-20°C 冰箱。样品溶解后请尽量根据需要分装保存,避免反复冻融。如果需要长期保存,建议 oligo以干粉形式保存。荧光标记的产品应避光保存。

产品技术资料:

内容包括oligo名称、序列、OD数、nmol 数、分子量、纯化方法及纯度指标。

运输:

干粉于冻存管中快递寄送。

个性服务:

分装、免费设计。


一、siRNA系列产品 :

普通siRNA oligo
  Biomics公司普通的 siRNA oligo 根据客户要求,采用脱盐、PAGE或HPLC纯化的方法,有效去除短、杂片段。客户只需用无RNA酶水稀释后即可使用。

目录号

产品说明

规格

价格

CS1004

普通 siRNA

5nmol

¥400

CS1005

普通 siRNA

10nmol

¥650

CS1010

普通 siRNA

25nmol

¥1200

siRNA对照

  一个完整的siRNA干扰实验必须使用阴、阳性对照以及转染试剂等来确定设计的siRNA序列对于基因的特异性沉默。


阴性对照

  阴性对照siRNA,是不会引起任何基因的沉默。实验中使用阴性对照能够帮助我们确认基因表达水平的降低是否是序列特异性的RNAi的结果。由于siRNA的合成方法、工艺以及转染试剂等因素可能导致广泛的基因沉默现象。如果没有阴性对照,研究人员很可能错误地将广泛的、非特异性基因沉默当作由RNAi引起的基因特异性沉默。 本公司提供 :


  和哺乳动物基因序列无同源性的通用阴性对照。 


  和哺乳动物基因序列无同源性的末端荧光标记 (5’ - FAM) 的通用阴性对照,方便我们使用流式细胞仪、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜等观察siRNA的转染情况,从而优化转染条件,提高转染效率。 


  与靶点siRNA序列有相同碱基组成,但排序不同且和mRNA无同源性的阴性对照;根据客户要求进行合成。



目录号

产品说明

规格

纯化方式

价格

交货期

CN1001

universal negative control siRNA

2.5 nmol

HPLC

¥118

2个工作日

CN2001

FAM negative control siRNA

2.5 nmol

HPLC

¥148

2个工作日


阳性对照

  阳性对照是已知的可以高效沉默特定基因的siRNA,阳性对照作为一个实验的系统检查是很重要的。当siRNA阳性对照达到预期实验结果时,就能说明转染、RNA的提取和基因表达检测方法是可靠的。


  本公司提供多种阳性对照,具体见下表:



目录号

靶基因

物种

CP0001

Lamin A/C

Human

CP0002

Beta-Actin

Human

CP0003

GAPDH

Human

CP0004

GFP - 22 Green fluorescent protein

Not specified

CP0005

Luciferase GL2

Not specified

CP0006

Luciferase GL3

Not specified

CP0007

Mm / Hs _ MAPK1

Human and mouse

CP0008

rat Rn _ Mapk1

Rat


目录号

产品说明

规格

纯化方式

价格

交货期

CP0000

Positive control siRNA

2.5 nmol

HPLC

¥118

2个工作日



RNAi系列合成优惠套餐

  客户只需要提供基因序列、GeneID或者Accession Number,我们免费设计、选择合适的位点,保证至少一对可以有效的抑制相应基因的表达,即mRNA水平的抑制效率在70%以上(转染效率至少达90%)。若未筛选出有效的siRNA片段(客户需提供详细的Q-PCR结果和细胞转染数据做为参考。鉴于siRNA沉默原理,客户提供的WB结果,仅作为参考),本公司为您免费再次设计和合成!



  Biomics silence siRNA Set I:价格¥1698

  (目录号:CT0001)


产品说明

规格

纯化方式

 相应基因的siRNA oligos

3位点

5nmol

HPLC

 阴性对照siRNA oligos

1对

2.5nmol

HPLC

 FAM标记阴性对照siRNA oligos

1对

2.5nmol

HPLC

 RNAi阳性对照siRNA oligos

1对

2.5nmol

HPLC

注: 套餐中的阴性对照为赠送,该对照适用于大部分人,大鼠,小鼠的基因。少数基因不适用时,

客户可选择针对自己的基因和种属设计特定NC(另收费,按照普通siRNA价格计)。



  Biomics silence siRNA Set II:价格¥2398

  (目录号:CT0002)

产品说明

规格

纯化方式

 相应基因的siRNA oligos

4位点

10nmol

HPLC

 阴性对照siRNA oligos

1对

2.5nmol

HPLC

 FAM标记阴性对照siRNA oligos

1对

2.5nmol

HPLC

 RNAi阳性对照siRNA oligos

1对

2.5nmol

HPLC

注: 套餐中的阴性对照为赠送,该对照适用于大部分人,大鼠,小鼠的基因。少数基因不适用时,

客户可选择针对自己的基因和种属设计特定NC(另收费,按照普通siRNA价格计)。



  Biomics silencer siRNA Set III:价格¥2180

  (目录号:CT0003)

产品说明

规格

纯化方式

 相应基因的siRNA oligos

3位点

5nmol

HPLC

 阴性对照siRNA oligos

1对

2.5nmol

HPLC

 FAM标记阴性对照siRNA oligos

1对

2.5nmol

HPLC

 RNAi阳性对照siRNA oligos

1对

2.5nmol

HPLC

 转染试剂

100 μL

 引物

1对

2nmol

HPLC

注: 套餐中的阴性对照为赠送,该对照适用于大部分人,大鼠,小鼠的基因。少数基因不适用时,

客户可选择针对自己的基因和种属设计特定NC(另收费,按照普通siRNA价格计)。



  Biomics silencer siRNA Set IV:价格¥2898

  (目录号:CT0004)

产品说明

规格

纯化方式

 相应基因的siRNA oligos

4位点

10nmol

HPLC

 阴性对照siRNA oligos

1对

2.5nmol

HPLC

 FAM标记阴性对照siRNA oligos

1对

2.5nmol

HPLC

 RNAi阳性对照siRNA oligos

1对

2.5nmol

HPLC

 转染试剂

100 μL


 引物

1对

2nmol

HPLC

注: 套餐中的阴性对照为赠送,该对照适用于大部分人,大鼠,小鼠的基因。少数基因不适用时,

客户可选择针对自己的基因和种属设计特定NC(另收费,按照普通siRNA价格计)。

siRNA载体构建服务
(目标:抑制效率≥70%的基因沉默位点)

1.技术特点:

1.1多种siRNA表达载体,可以在细胞内直接转录出siRNA,行使其RNAi功能,包括:
1.1.1 U6启动子表达载体;
1.1.2 启动子表达载体;
1.1.3 U6、H1双启动子表达载体;
1.1.4 CMV启动子表达载体;

载体带有GFP标签可以监测转染效率。构建好的siRNA表达载体可直接用于转染细胞进行RNAi实验;
本公司还可根据客户需要提供各种商业化表达载体;
本公司可以为客户构建线性siRNA表达载体,shRNA表达载体,miRNA表达载体以及病毒型RNAi载体。

2.构建流程:

2.1 siRNA靶点设计;
客户提供靶基因的siRNA序列,由本公司将其克隆到siRNA表达载体上。
客户提供靶基因的相关信息(基因的mRNA序列或Genbank Accession No.),根据客户要求,本公司设计高效特异性的3-4条针对靶基因的siRNA。
2.2 合成设计好的DNA并退火形成双链DNA,克隆到客户要求的载体上。
2.3通过测序进行验证。
2.4构建成功的siRNA质粒连同测序报告、产品说明书一起寄送到客户手中。

注:可根据客户要求提供siRNA的阳性及阴性对照质粒。

3.质量保证:

符合设计要求的siRNA序列测序结果。

4.各种商业化表达载体:

产品编号

载体

启动子

筛选基因

标记基因

BV0011

pRNAi-U6H1/Neo

U6和H1

Neomycin

GFP

BV0012

pRNAi-H1.1/Neo

H1

Neomycin

GFP

BV0013

pRNAi-U6.1/Neo

U6

Neomycin

GFP

BV0014

pRNAi-CMV3.1/Neo

CMV

Neomycin

GFP

BV0015

pRNAi-CMV3.2/Neo

CMV

Neomycin

GFP

BV0016

pRNAi-CMV4.1/Neo

CMV

Neomycin

-

BV0109

pRNAi-hU6.2/Lenti

U6

Neomycin

-

BV0110

pRNAi-U6.2/Lenti

U6

Neomycin

GFP



修饰和标记的siRNA oligo

  Biomics可对siRNA进行多种标记物的标记,包括FAM、Cy3、Cy5、胆固醇(cholesterol)、Biotin。相对于未标记的siRNA具有转染情况可视的优点,通过流式细胞仪、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜等可以观察到荧光标记的siRNA,方便优化转染条件、siRNA胞内定位等,同时可根据对转染过程的全程追踪来分析转染和蛋白表达的关系。研究表明,反义链5’端标记会影响干扰效果,其他三个末端修饰后对沉默活性几乎没影响,目前公认最好的是将荧光修饰标记在正义链的5’端位点。5’-荧光标记的siRNA有助于直接观察转染效率。本公司提供的5’-荧光标记的siRNA通常用FAM进行标记。

名称

5nmol

10nmol

碱基修饰

2’-Ome rU

100

120

2’-Ome rC

100

120

2’-Ome rG

100

120

2’-Ome rA

100

120

末端标记

5’-氨基

300

360

5’-Phosphate-on

300

360

5’-cholestrol

300

360

5’-Biotin

300

360

5’-FAM(绿色荧光)

300

360

5’-Cy3(红色荧光)

询价

询价

3’-Phosphate-on

询价

询价


动物实验用siRNA


动物体内RNAi药物(siRNA﹑miRNA﹑shRNA等)的一般给药方法与途径

一般来说,给药方法可分为全身给药(systemic delivery)和局部给药(local delivery)。


一、局部给药:

迄今已有很多通过局部给药途径进行动物体内RNAi药物药效评价和国外RNA药物I-III期临床试验的报道。


◆给药方式:局部给药是将RNAi药物分子(siRNA﹑miRNA﹑shRNA等)通过注射﹑滴入﹑涂抹或喷雾等方式直接导进到一个特定的组织或器官中。

◆适用范围:局部给药的组织或器官包括眼部、耳部、鼻腔、呼吸道、肺部、皮肤(表皮、真皮和皮下组织)、膀胱、子宫腔等。

◆优势:局部给药可直接应用裸RNA药物分子作用于靶向器官或组织。另外,局部给药相对全身给药在用药量上要少一些。


二、全身给药

◆给药方式:由于体内大部分器官组织并不能够通过局部给药的方法将RNA药物分子直接导入,因此一般往往采用静脉注射的方式进行全身给药。
◆适用范围:静脉给药适合于心脏、肝、肾、肺、肿瘤组织等血流丰富的组织器官。
◆全身给药可能遇到的问题及解决方式:

由于血液中存有大量的核酸酶(Rnases),会直接导致RNA药物分子的迅速降解,使得RNA干扰机制丧失或药效丢失。如何有效解决裸RNA药物分子在血液中的稳定性是十分关键的。

其解决方案包括: 

1)化学修饰RNA分子(如,常规2′-OMe或胆固醇修饰等)
2)利用功能高分子或脂质体载体包裹裸RNA药物分子,使其达到在血液中稳定循环。
这样不仅解决了RNA药物分子在血液中的稳定性,同时,所做的修饰分子或包裹载体如具有特定靶向性,也可以解决RNA药物分子在全身传输中的组织器官靶向性难题,使其能够到达指定的病症部位或肿瘤组织。


动物体内RNAi药物(siRNA﹑miRNA﹑shRNA等)的一般给药用量参考


综合大多数报道的研究结果,进行动物体内实验时可参考如下用量剂量:


1、局部给药 

小鼠每次每个部位RNA给药量(小鼠一般体重约为15-25g):0.05-0.50mg
大鼠每次每个部位RNA给药量(大鼠一般体重约为150-250g):0.1-1.0mg


2、全身给药 

小鼠每次RNA给药量(小鼠一般体重约为15-25g):0.5-5.0mg/kg
大鼠每次RNA给药量(大鼠一般体重约为150-250g):1.0-10mg/kg


不同种类实验动物一次给药能耐受的最大剂量可参考下表
(mL)

动物名称

灌胃

皮下注射

肌肉注射

腹腔注射

静脉注射

小鼠

0.9

1.5

0.2

1

0.8

大鼠

5.0

5.0

0.5

2

4.0

200

10

2.0

5

10

300

50

3.0

10

20

500

100

4.0

100


二、 miRNA 系列产品

miRNA mimics


miRNA mimics:涵盖了miRBase13.0数据库中人、小鼠和大鼠几乎所有的miRNA,运用化学合成的方法,模拟生物体内源的miRNA,特异性增强内源性miRNA的功能。同时本本公司还可以为客户提供不同长度、不同形式,由客户自行设计的miRNA。

产品名

规格

价格

修饰价格

miRNA mimics

5nmol

400

询价

miRNA mimics

10nmol

650

询价

Customer - defined miRNA mimics

10nmol

650

询价


miRNA inhibitor


miRNA inhibitor:化学修饰的专门针对细胞中特异的靶miRNA的抑制剂,可特异、高效地抑制生物体内源性miRNA的活性,是研究miRNA功能的必要工具。应用该产品可检测miRNAs所调节的基因表达和对信号通路的影响,对阐明miRNA在诸如细胞发育、增殖、分化和凋亡中的机理有重要意义,加速miRNA基因沉默效应的研究。它可以特异的靶向和敲除单个的miRNA分子。使用miRNA inhibitor可以用筛选miRNA靶位点;筛选调控某一基因表达的miRNA;筛选影响细胞发育过程的miRNA。


产品名规格价格修饰价格

miRNA inhibitor

5nmol

400

询价

miRNA inhibitor

10nmol

650

询价

Customer - defined miRNA inhibitor

10nmol

650

询价


miRNA 对照


产品名

规格

价格

其他修饰价格

miRNA mimics negative control

2.5nmol

118

询价

miRNA inhibitor negative control

2.5nmol

118

询价

Fam miRNA mimics negative control

2.5nmol

148

询价

FAM miRNA inhibitor negative control

2.5nmol

148

询价


miRNA 过表达质粒构建

   miRNA过表达载体是根据客户需要,将完整的Pre-miRNA表达框克隆于II型或III型启动子的下游,通过转染的方式将载体导入培养细胞,转录出Pre-miRNA进而加工成成熟的miRNA,模拟内源性miRNA发挥调控效应和功能。


1 服务流程:

a) 提供您所需要构建miRNA名称,miRbase登录号或者序列,由我公司专业技术人员进行实验设计并给出报价;

b) 签订miRNA质粒载体构建合成合同,支付预付款;

c) 设计合成引物, PCR反应扩增及PCR产物酶切;

d) 将酶切产物纯化,克隆至miRNA表达质粒载体系统;

e) 最后通过DNA测序,确认插入片段的准确性;

f) miRNA表达载体合成结束,发货并向客户提供实验报告。


2 提供结果

a)质粒;

b) 测序图谱/序列;

c) miRNA载体构建报告书


miRNA 抑制表达质粒构建

     miRNA抑制剂(Anti-miRNA)表达载体,根据客户需要,将含有一个或多个miRNA结合位点的序列克隆于II型或III型启动子的下游,通过转染的方式将载体导入培养细胞,转录出含miRNA结合位点的RNA序列,可特异、高效地抑制生物体内源性miRNA的活性,以进行功能缺失性研究,是研究miRNA功能的必要工具。



1 服务流程:

a) 提供您所需要构建miRNA名称,miRbase登录号或者序列,由我公司专业技术人员进行实验设计并给出报价;

b) 签订miRNA抑制表达质粒载体构建合成合同,支付预付款;

c) 设计合成引物, PCR反应扩增及PCR产物酶切;

d) 将酶切产物纯化,克隆至miRNA抑制表达质粒载体系统;

e) 最后通过DNA测序,确认插入片段的准确性;

f) miRNA抑制表达质粒合成结束,发货并向客户提供实验报告。


2 提供结果

a)质粒;

b) 测序图谱/序列;

c) miRNA抑制表达质粒载体构建报告书。

miRNA前体(miRNA precusor )


       Biomics采用先进工艺合成与体内完全一致的高质量pre-miRNA,而且可以做到量产,突破了目前RNA合成序列长度只能在50碱基左右的障碍,大大提高了合成效率。将此合成的miRNA前体转染至细胞后,可形成与内源性成熟miRNA化学结构及生物功能一致的功能性单链。miRNA mimics是模拟pre-RNA人工设计的双链小RNA,虽然其化学结构和生物活性与内源性miRNA接近,但仍存在诸多差别。我们在研究中发现同样数量的pre-miRNA和miRNA mimics同时转染细胞时,pre-miRNA能更特异且高效的形成mature miRNA。还有研究报道,与双链的siRNA、shRNA、miRNA mimic相比,pre-miRNA的特殊结构对细胞、动物体内的非靶基因或功能影响更小,且干扰素效应更低,因此pre-miRNA在系统多因素的研究中具备独特的优势。

   增补miRNA表达活性以取得功能效应的研究
   筛选调控基因表达和影响细胞途径的miRNA
   鉴别验证miRNA靶点

产品名规格价格周期

miRNA precusor

2.5 nmol

1000

2周

miRNA precusor

5nmol

1600

2周

miRNA precusor

10nmol

2500

2周

miRNA precusor control2.5nmol4002周
Customer - defined miRNA precusor5nmol询价2周

注:
1)Control可提供人,大鼠,小鼠现货,其他种属需定制
2)其他规格请询价
3)非常规种属miRNA precusor订购5nmol,起订量需达到5种以上


动物实验用miRNA


动物体内RNAi药物(siRNA﹑miRNA﹑shRNA等)的一般给药方法与途径

一般来说,给药方法可分为全身给药(systemic delivery)和局部给药(local delivery)。


一、局部给药:

迄今已有很多通过局部给药途径进行动物体内RNAi药物药效评价和国外RNA药物I-III期临床试验的报道。


◆给药方式:局部给药是将RNAi药物分子(siRNA﹑miRNA﹑shRNA等)通过注射﹑滴入﹑涂抹或喷雾等方式直接导进到一个特定的组织或器官中。

◆适用范围:局部给药的组织或器官包括眼部、耳部、鼻腔、呼吸道、肺部、皮肤(表皮、真皮和皮下组织)、膀胱、子宫腔等。

◆优势:局部给药可直接应用裸RNA药物分子作用于靶向器官或组织。另外,局部给药相对全身给药在用药量上要少一些。


二、全身给药

◆给药方式:由于体内大部分器官组织并不能够通过局部给药的方法将RNA药物分子直接导入,因此一般往往采用静脉注射的方式进行全身给药。
◆适用范围:静脉给药适合于心脏、肝、肾、肺、肿瘤组织等血流丰富的组织器官。
◆全身给药可能遇到的问题及解决方式:

由于血液中存有大量的核酸酶(Rnases),会直接导致RNA药物分子的迅速降解,使得RNA干扰机制丧失或药效丢失。如何有效解决裸RNA药物分子在血液中的稳定性是十分关键的。


其解决方案包括:
1)化学修饰RNA分子(如,常规2′-OMe或胆固醇修饰等)
2)利用功能高分子或脂质体载体包裹裸RNA药物分子,使其达到在血液中稳定循环。
这样不仅解决了RNA药物分子在血液中的稳定性,同时,所做的修饰分子或包裹载体如具有特定靶向性,也可以解决RNA药物分子在全身传输中的组织器官靶向性难题,使其能够到达指定的病症部位或肿瘤组织。


动物体内RNAi药物(siRNA﹑miRNA﹑shRNA等)的一般给药用量参考


综合大多数报道的研究结果,进行动物体内实验时可参考如下用量剂量:


1、局部给药 

小鼠每次每个部位RNA给药量(小鼠一般体重约为15-25g):0.05-0.50mg
大鼠每次每个部位RNA给药量(大鼠一般体重约为150-250g):0.1-1.0mg


2、全身给药 

小鼠每次RNA给药量(小鼠一般体重约为15-25g):0.5-5.0mg/kg
大鼠每次RNA给药量(大鼠一般体重约为150-250g):1.0-10mg/kg


不同种类实验动物一次给药能耐受的最大剂量可参考下表
(mL)

动物名称

灌胃

皮下注射

肌肉注射

腹腔注射

静脉注射

小鼠

0.9

1.5

0.2

1

0.8

大鼠

5.0

5.0

0.5

2

4.0

200

10

2.0

5

10

300

50

3.0

10

20

500

100

4.0

100


修饰和标记的miRNA

  Biomics可对miRNA进行多种标记物的标记,包括FAM、Cy3、Cy5、胆固醇(cholesterol)、Biotin。相对于未标记的miRNA具有转染情况可视的优点,通过流式细胞仪、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜等可以观察到荧光标记的miRNA,方便优化转染条件、miRNA胞内定位等,同时可根据对转染过程的全程追踪来分析转染和蛋白表达的关系。研究表明,反义链5’端标记会影响实验效果,其他三个末端修饰后对活性几乎没影响,目前公认最好的是将荧光修饰标记在正义链的5’端位点。5’-荧光标记的miRNA有助于直接观察转染效率。本公司提供的5’-荧光标记的miRNA通常用FAM进行标记。



名称

5nmol

10nmol

碱基修饰

2’-Ome rU

100

120

2’-Ome rC

100

120

2’-Ome rG

100

120

2’-Ome rA

100

120

末端标记

5’-氨基

300

360

5’-Phosphate-on

300

360

5’-cholestrol

300

360

5’-Biotin

300

360

5’-FAM(绿色荧光)

300

360

5’-Cy3(红色荧光)

询价

询价

3’-Phosphate-on

询价

询价





点击或扫描