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新型亲和分子纯化外泌体

发布时间:2016-04-20

新型亲和分子纯化外泌体

MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS


◆案例・应用


1.     从人血清中提取外泌体的产量比较

使用该试剂盒,超滤和表面抗原的抗体亲和纯化的方法提取人血清样品的外泌体,接着中CD9和CD63抗体进行免疫印迹实验进行检测。



2.     常规沉淀方法的比较

来自K562(人慢性粒细胞白血病(CML))细胞培养上清(无血清培养基,或者10% 外泌体缺失FBS补充培养基)用该试剂盒、超滤和多聚物沉淀方法纯化外泌体的产量和纯度比较。

MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS

离心(10,000 ×g ,30分钟),从1mL预处理的K562细胞培养上清(无血清培养基或者10%外泌体缺失FBS补充培养基)收集外泌体(根据试剂盒操作流程,反应时间:3小时)

超滤

离心(10,000 ×g ,30分钟),10mL预处理的K562细胞培养上清(无血清培养基或者10%外泌体缺失FBS补充培养基)超滤(110,000×g,70分钟)。用TBS重悬沉淀后,重新超滤沉淀的片段回收。

多聚物沉淀

离心(10,000 ×g ,30分钟),从1mL预处理的K562细胞培养上清(无血清培养基或者10%外泌体缺失FBS补充培养基)收集外泌体(根据公司A的实验流程,预计时间:过夜)


2-1.  用NanoSight进行电镜显微镜分析和Nano示踪分析

          使用MagCaptureTM、超滤和多聚物沉淀从K562 细胞培养上清(无血清培养基)获得的外泌体片段的颗粒大小用NanoSight LM-10进行鉴定。收集的外泌体片段(2-4 x 1010颗粒)用2%多聚甲醛进行固定,用电镜分析。




2-2. K562细胞培养上清回收量和纯度的比较(无血清培养基)

      用MagCaptureTM、超滤和多聚物沉淀从K562 细胞培养上清(无血清培养基)获得样品进行电泳。接着用银染,CD63, Flotilin-2和Lamp-1抗体进行免疫印迹实验。



2-3. 从K562细胞培养上清获得回收率和纯度的比较(用10% FBS-补充)

       用MagCaptureTM、超滤和多聚物沉淀三种方法,从K562 细胞培养上清(10% 外泌体-缺失 FBS补充培养基)获得样品进行电泳,用银染方法和CD63、Lamp-1和Flotilin-2抗体进行免疫印迹。同时,收集的样品也进行质谱测定,比较所有鉴定的多肽中来自K562细胞的人来源多肽的百分比(由于添加到细胞培养基的FBS中牛蛋白聚集体是混杂的,所以人来源多肽的比率会下降)


3.     细胞培养上清或者血清的预处理



4.     检测流程




货号名称规格
293-77601 MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS   
 外泌体纯化试剂盒(PS亲和法)
10 tests










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