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用于类器官培养的Afamin/Wnt3a CM

发布时间:2019-06-26



特点

Wnt3a活性
Wnt3a活性

Afamin蛋白(血清组成部分之一)使得Wnt3a保持稳定状态,所以可以维持高Wnt活性。

品质稳定
品质稳定

根据TOP FLASH实验结果,可以确定培养的类器官中有足够高的Wnt3a活性。

无血清
无血清

含有血清替代品Afamin蛋白,可在无血清条件下进行类器官培养。






                                人类大肠来源类器官培养图示 


                                       (人类大肠来源类器官培养图示)


类器官培养等会用到Wnt3a,在无血清培养基条件下如何保证其活性是一直以来未被解决的难题。
本培养基是由细胞培养上清纯化获得。
上清中含有维持血清中Wnt3a稳定性的Afamin蛋白及Wnt3a。
因此可以实现无血清条件下类器官的稳定培养。

Afamin/Wnt3a CM的基本技术

Afamin/Wnt3a CM是利用大阪大学蛋白质研究所高木教授和庆应义塾大学医学部佐藤教授的共同研发成果进行产品转化研发出的产品。含有稳定且高活性的Wnt3a,使得类器官的长期培养成为可能。
2016年Mihara等人发现血清中的Afamin蛋白质,可与Wnt3a结合形成复合体,维持其较高活性,由此可见Afamin/Wnt3a复合体可应用于类器官的长期培养。

Afamin有助于提高Wnt3a的稳定性

2016年Mihara等人发现血清中的Afamin蛋白可与Wnt3a结合形成复合体,
在无血清培养基中也能维持较高的稳定性。

Afamin有助于提高Wnt3a的稳定性

Afamin/Wnt3a复合体具有较高的活性

通过TOP FLASH实验发现,Afamin/Wnt3a复合体和重组Wnt3a蛋白相比,
稳定的Afamin/Wnt3a复合体的活性更高。

Afamin/Wnt3a复合体具有较高的活性

出自:Mihara, et al., eLife (2016)

用Afamin/Wnt3a复合体进行类器官培养

用Afamin/Wnt3a复合体进行人类大肠类器官培养。传代培养后,
和传统的使用Wnt3a(R&D)或者含有血清的Wnt3a Conditioned Medium培养的方法相比,
其可以进行更加长期稳定地培养。

Passage 0 ( day 6 )

Passage 1 ( day 12 )

Passage 2 ( day 18 )

Bar:200um

出自:Mihara, et al., eLife (2016)

用Afamin/Wnt3a CM持续培养LGR5阳性细胞

培养Lgr5启动子调节下的td Tomato类器官株时,
同时使用Afamin/Wnt3a CM和市售的重组Wnt3a培养基进行培养,
结果表明使用Afamin/Wnt3a CM进行培养的一组LGR5阳性细胞存活率更高。

Afamin/Wnt3a CM

市販recombinant Wnt3a

Negative Control

根据eLife(请参考引用)的使用浓度(300 ng/mL)进行设定
引用: Mihara, et al., eLife (2016)

出自:庆应义塾大学医学部坂口光洋纪念讲座(类器官医学)佐藤俊朗教授共同研发

与一般Wnt3a相比

以往进行类器官培养使用的Wnt3a,一般是市售的重组Wnt3a或是由ATCC等处获得的可表达Wnt3a的细胞进行培养后得到含有Wnt3a的Conditioned Medium。多数情况下,使用这些Wnt3a进行类器官培养时,Wnt signal检测获得的活性值并不高,这也是导致培养失败的原因之一。
此外,在使用细胞株表达蛋白的Conditioned Medium时,为了维持Wnt3a活性,需要往培养基中加入血清,但是血清的存在,会对类器官的增殖及培养产生一定影响。Afamin/Wnt3a CM已被验证有较高的Wnt活性并无需添加血清即可进行类器官的培养。

 Afamin/Wnt3a CMRecombinant Wnt3aWnt3a CM prepared
for lab use
Wnt3a活性Afamin蛋白可维持Wnt3a高活性的持续存在如果活性不足,LGR5阳性干细胞的存活和长期培养是无法维持血清的存在有利于维持持续的高活性
品质稳定性类器官培养的Wnt signal活性评价Wnt signal活性评价有批间差,活性评价差别较大
有无血清无血清无血清血清对于类器官的培养有一定影响



类器官培养用Afamin/Wnt3a CM

Afamin/Wnt3a CM是由表达Afamin蛋白和Wnt3a蛋白的细胞培养上清纯化获得的。 该培养上清中含有Afamin蛋白和Wnt3a蛋白,在使用无血清培养基培养时也可以维持高水平的Wnt3a活性。

Afamin/Wnt3a CM的制备方法

细胞中导入Wnt3a以及
Afamin基因

对导入基因的细胞进行大量培养,
在培养基中分泌Afamin/Wnt3a复合体

回收细胞上清
(Conditioned Medium),
通过过滤灭菌处理后,
分装为成品 (活性评价)

Afamin/Wnt3a CM的概要

货号

产品名称

主要成分

包装规格

溶液

价格

J-ORMW301R

Afamin/Wnt3a CM

Mouse Wnt3a Human Afamin

10mL

Advanced D-MEM/F12

¥6,000


参考文献

  • E. Mihara, et al., Active and water-soluble form of lipidated Wnt protein is maintained by a serum glycoprotein afamin/α-albumin., eLife 5 (2016)
  • K. Nanki, et al., Divergent routes toward Wnt and R-Spondin niche independency during Human., Gastric Carcinogenesis., Cell 174 (2018)
  • S. Sugimoto, et al., Reconstruction of the human colon epithelium in vivo., Cell Stem Cell 22 (2018)
  • T. Seino, et al., Human pancreatic tumor organoids reveal loss of stem cell niche factor dependence during disease progression., Cell Stem Cell 22 (2018)
  • H. Oshima, et al., Stat3 is indispensable for damage-induced crypt regeneration but not for Wnt-driven intestinal tumorigenesis. FASEB J. Aug. 29, (2018)

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