免疫细胞分型常见标志物—B细胞分型标志物

B细胞也是一异质性群体，显示不同的功能和表面标志。CD5表达与否，将B细胞分为B1和B2两个亚群。B1细胞为CD5⁺B细胞，主要识别非蛋白质抗原，属于固有类淋巴细胞，B2即通常指的B细胞，为CD5^-B细胞，主要识别蛋白质抗原。在Th细胞的辅助下，B2细胞才能被完全激活并介导对T细胞依赖抗原的免疫应答，产生特异性抗体。B2细胞介导的免疫应答特点为：可发生体细胞突变，有亲和力成熟，产生高亲和力抗体，可产生免疫记忆细胞¹。

1. 产生抗体介导体液免疫应答

◆中和作用：针对病毒、胞内寄生菌、细菌外毒素。

◆调理作用：针对胞外复制的细菌。

◆参与补体的溶细胞或溶菌作用。

◆抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用（ADCC）：针对病毒感染细胞、肿瘤细胞。

2. 提呈可溶性抗原

B细胞是一类抗原提呈细胞，活化后其表面BCR结合可溶性抗原，通过内吞和加工后，以抗原肽-MHC Ⅱ类分子复合物形式提呈给CD4⁺T细胞。

3. 参与免疫调节

激活的B细胞产生大量细胞因子、参与免疫调节、炎症反应及造血。

      哺乳类动物B细胞的分化和成熟主要分为祖B细胞、前B细胞、不成熟B细胞、B细胞的成熟（过渡B细胞到成熟B细胞）、活化B细胞和浆细胞几个阶段²。其中祖B细胞、前B细胞和不成熟B细胞的分化是抗原非依赖的，其分化过程在骨髓中进行。抗原依赖阶段是指成熟B细胞在抗原刺激后活化，并继续分化为合成和分泌抗体的浆细胞，这个阶段的分化主要是在外周免疫器官中进行的。

祖B细胞 (pro-B cell)

这种发育早期的B细胞，发生在人胚胎约第9周开始，小鼠约第14天开始。尚未表达B细胞系的特异表面标志，也未发生lg基因重排，仍处于胚系基因(germline) 阶段。但，祖B细胞的晚期可出现B系特异标志，Thy-1 、Tdt 、B200 、mb-1 等分子。

前B细胞 (pre-B cell)

不成熟B细胞 (immature B cell)

      此阶段发生轻链基因重排，故可组成完整的IgM分子，并表达于膜表面(IgM)，可称为Bμ细胞。此种细胞如与抗原结合，易使膜受体交联，产生负信号，使B细胞处于受抑状态，不能继续分化为成熟B细胞。这种作用可能是使自身反应B细胞克隆发生流产，是形成B细胞自身耐受的机制之一。不成熟B细胞开始丧失Tdt和CD10，但可表达CD22、CD21及FcR。同时CD19、CD20以及MHCⅡ类分子表达量增加。

图1：早期B细胞的分化过程及主要标志

CLPs, common lymphoid progenitors; BM, bone marrow; RAG, recombinase activating genes; TdT, terminal deoxynucleotidyl transferase; SLC, surrogate light chain; BCR, B cell receptor

B细胞的成熟

未成熟的B细胞将在几天内离开骨髓，并进入循环系统作为过渡B细胞(transitional B cells)。根据细胞表面标记的表达和功能，将过渡B细胞细分为3组：T1、T2和T3 B细胞³。这些细胞可以在血液和次级淋巴器官中发现，但很少进入淋巴管。这些过渡细胞代表分化为更成熟的前免疫B细胞群之前的最后阶段，分别为滤泡(follic-lar, FO) B细胞、边缘区(marginal zone, MZ) B细胞、生发中心(germinal center, GC) B细胞和记忆性(memory) B细胞。过渡B细胞转变为成熟B细胞亚群的机制没有完全研究清楚，细胞因子的可用性、BCR特异性和与预先存在的成熟B细胞的竞争都发挥了作用⁴。

过渡B细胞成熟主要发生在脾脏中，T1 B细胞通过BAFF家族的配体和受体介导的信号刺激，而成熟为T2 B细胞。T1 B细胞存在于脾髓和毛囊外的外周动脉淋巴管套(PALS), T2 B细胞存在于滤泡⁵。在脾脏中也发生基于抗原的过渡B细胞的选择，以确保那些对自身抗原具有低亲合力的成熟B细胞的存活，以及清除那些对自身抗原具有高亲和力的成熟B细胞。然后，T2 B细胞分化成能够进入生发中心的循环B细胞或填充于边缘区的非循环B细胞。生发中心中的B细胞成熟与抗体V区基因的体细胞超突变相关，这提供了产生对抗原具有高亲和力的抗体的基础²。离开生发中心的抗原选择的B细胞变为记忆性B细胞或浆母细胞(plasmablasts)。

表2 人和小鼠的外周B细胞亚群的表面标记、相关转录因子和定位

TACI, transmembrane activator and cyclophilin ligand interactor; BCMA, B cell maturation antigen; BR3, B lymphocyte stimulator receptor 3; Ig, immunoglobulin.

活化B细胞 (activated B cell)

      成熟B细胞被相应抗原或多克隆刺激剂刺激后成为活化B细胞，继而发生增殖和分化，在此过程中，膜结合Ig水平逐渐降低，而分泌型Ig逐渐增加，并可发生免疫球蛋白基因重链类别的转换。活化B细胞中的一部分可分化为小淋巴细胞，停止增殖和分化，并可存活数月至数年，当再次与同一抗原接触时，很快发生活化和分化，产生抗体的潜伏期短，抗体水平高，维持时间长，这种B细胞称为记忆B细胞(memory B cell)。

浆细胞 (plasma cell，PC)

     又称抗体分泌细胞(antibody secreting cell)。成熟B细胞接受抗原刺激后，在抗原提呈细胞和Th细胞的辅助下成为活化B细胞，进而分化为浆细胞。当成熟B细胞分化为浆细胞时，B细胞表面的部分标志消失，并出现一些新的浆细胞特有标志，如浆细胞抗原-1(PCA-1) 等分子，而mIg, MHCⅡ类抗原、CD19、CD20、CD21、CD22等标记消失。并可发生Ig的类别转换，从产生IgM转换为产生IgG 、IgA或IgE的B细胞。