N多培养基问题，怎么破？

1.怎样查到一个特定细胞株的相关知识和培养条件？                                               

ATCC（American Type Culture Collection）收集了绝大多数细胞的详细资料。打开ATCC网页的Cells and hybridomas链接，输入细胞名称就可以搜索ATCC的细胞数据库。数据库中有每一种细胞的详细描述，包括细胞的来源，培养和冻存条件，以及相关

文献等资料。                                                                                                     

2.如何选用特殊细胞系培养基？                                                                         

培养某类型细胞没有固定的培养条件。MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199

中同样容易生长。总之，首选MEM、DMEM做贴壁细胞培养；RPMI1640做悬浮细胞

培养；各种目的无血清培养首选AIMV培养基SFM。新的细胞培养时要详查资料         

3.自己新配制的液体培养基能保存多久？                                                             

我们建议将新配制的培养基放置于4℃，避光保存尽量在一周内使用完毕。培养基越新

鲜越好。                                                                                                         

4.培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？                                             

一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在一到两周内使用它。因为一些

抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。                                                  

5.培养基中是否须添加抗生素？                                                                         

除了特殊筛选系统外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。           

为防止细菌、真菌污染，可以加入青霉素-链霉素双抗溶液，其培养基中的终浓度为青霉

素100U/ml，链霉素为100ug/ml。                                                                     

6.液体培养基可以放-20℃保存吗？                                                                     

不可以！因为在-20℃下，培养基中的盐容易析出，培养基融化后，有的盐可能无法重

新溶解，从而导致培养基渗透压降低，培养细胞时，细胞容易破裂而死亡。               

7.为何培养基保存于4℃冰箱中，颜色会偏暗红色，且pH值越来越偏碱性？             

培养基保存于4℃冰箱中， 培养基内之CO₂ 会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而

培养基中之酸碱指示剂(通常为phenol red) 的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基

偏碱之结果，将造成细胞生长停滞或死亡。培养基偏碱时，可以通入无菌过滤之CO₂，

以调整pH 值。                                                                                                 

8.为什么你公司液体培养基1640颜色发黄，是pH值不对吗？                                   

不是。因为配方原因，1640为碱酚红型，其中酚红的浓度只有DMEM的四分之一，所

以是因为酚红浓度低，而非PH值低。                                                                   

9.培养液pH是怎样影响细胞生长的？                                                                   

由于大多数细胞适宜PH值为7.2-7.4，偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞

对PH值要求也不完全相同，原代细胞培养一般对PH值变动耐受差，无限细胞系耐受力强。 总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些，偏酸环境中更有利于细胞的生长。因此，

配制培养用液时可把液体的PH值稍微调的偏酸一些。液体在经过0.1um或0.2um滤膜过

滤时，PH值会向上浮动0.2左右。                                                                         

10.培养液渗透压是怎样影响细胞生长的？                                                             

当细胞内、外环境的分子浓度不同时就会产生渗透压。这种情况下，水分通过渗透流入或流出细胞，从而改变细胞的内环境。高渗透压迫使水分从细胞中扩散出来导致细胞收缩，这种情况会使DNA和蛋白遭到破坏，细胞周期停滞以及最终使细胞死亡；反之，低渗透压使水分流入细胞内，使细胞肿胀破裂。                                                                     

11.为什么有客户要求培养基中不含酚红？                                                             

研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，细胞培养，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加酚红的培养基。                                                           

12.酚红的作用是什么？                                                                                       

酚红在培养基中被用来作为PH值指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。

13.你公司干粉培养基里含NaHCO₃吗？                                                                 

所有的干粉培养基中都不含NaHCO₃ 。请依据说明书或包装袋上的标注，在干粉培养基

完全溶解后添加NaHCO₃ 。                                                                                 

14.NaHCO₃的作用是什么？                                                                                 与CO2一起形成缓冲系统，保持培养基PH值稳定。                                                         

15.我们实验室培养箱CO₂浓度一直以来都是5%，这样可以吗？                               

当然不可以，不同的培养基要求添加NaHCO₃的量不一样，如DMEM要求添加3.7g/L，

为了保持PH值稳定，必须用高浓度的CO₂平衡，一般不低于8%，而1640等要求添加NaHCO₃ 2.2g/L，还有些培养基要求添加更少，那么这些培养基就要求较低的浓度平

衡，一般是5%。                                                                                             

16.培养基中丙酮酸钠的作用是什么？                                                                   

丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是

   如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。                                                   

丙酮酸钠的贮存液浓度一般为50mM，-20℃保存，培养基中的终浓度为1mM。         

17.谷氨酰胺的作用是什么？                                                                               

几乎所有的细胞对谷氨酰胺都有较高的要求。谷氨酰胺脱掉氨基后，可作为培养细胞的

能量来源，参与蛋白质的合成和能量代谢。在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。

所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。                                                    

谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20℃冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺

的液体培养基4度冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。                   

18.在培养基中加入HEPES有何好处？                                                                   

培养基中最常用的Buffer system是碳酸氢盐，它可提供营养，但却在生理PH值条件下会降低缓冲能力。而HEPES是一种很强的Buffer，加入HEPES能使细胞培养基在PH7.2-7.6条件下缓冲能力增强。                                                                                         

Hepes的贮存液浓度一般为1M，常温保存。培养基中的终浓度为25mM，即5ml 1M的Hepes加入到200ml完全培养基中。                                                                     

19.GlutaMAX-Ⅰ是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-Ⅰ？这个二肽有多稳定？     

GlutaMAX-Ⅰ是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的a-氨基用L-丙氨酸来保护。一种

肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。                                                         

GlutaMAX-Ⅰ二肽非常稳定，即使在121℃灭菌20min， GlutaMAX-Ⅰ二肽溶液有最

小的降解；而在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解。                                         

L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的，但其在溶液中不稳定，经过一段时间后会降解，确

切的降解率一直没有最终确定。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具

有毒性。因此GlutaMAX-Ⅰ是细胞培养中谷氨酰胺的替代品。                                 

20.可否使用与原先培养条件不同的培养基？                                                         

不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培

养条件不同的培养基，细胞大多无法立即适应，造成细胞无法存活。                         

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