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细胞培养基问题汇总

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发表时间:2021-09-10 14:22

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培养基是细胞培养中不可缺少的营养成分,但是最基础的培养基却给实验者带来了一系列的问题。

别小看细胞培养,这里可蕴含着大学问。


1.怎样查到一个特定细胞株的相关知识和培养条件?

ATCC(American Type Culture Collection)收集了绝大多数细胞的详细资料。打开ATCC网页的Cells and hybridomas链接,输入细胞名称就可以搜索ATCC的细胞数据库。数据库中有每一种细胞的详细描述,包括细胞的来源,培养和冻存条件,以及相关文献等资料。


2.如何选用特殊细胞系培养基?

培养某类型细胞没有固定的培养条件。MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样容易生长。总之,首选MEM、DMEM做贴壁细胞培养;RPMI1640做悬浮细胞培养;

新的细胞培养时要详查资料。


3.自己新配制的液体培养基能保存多久?

我们建议将新配制的培养基放置于4℃,避光保存尽量在一周内使用完毕,培养基越新鲜越好。


4.培养基中添加了血清和抗生素后,可长期保存吗?

一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,您应该在一到两周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。


5.培养基中是否须添加抗生素?

除了特殊筛选系统外,一般正常培养状态下,培养基中不应添加任何抗生素。

为防止细菌、真菌污染,可以加入青霉素-链霉素双抗溶液,其培养基中的终浓度为青霉素100U/ml,链霉素为100ug/ml,但是不建议长期使用。


6.液体培养基可以放-20℃保存吗?

不可以!因为在-20℃下,培养基中的盐容易析出,培养基融化后,有的盐可能无法重新溶解,从而导致培养基渗透压降低,培养细胞时,细胞容易破裂而死亡。


7.为何培养基保存于4℃冰箱中,颜色会偏暗红色,且pH值越来越偏碱性?

培养基保存于4℃冰箱中, 培养基内之CO2 会逐渐溢出,造成培养基越来越偏碱性。而培养基中的酸碱指示剂(通常为phenol red) 的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果, 将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时, 可以通入无菌过滤的CO2, 以调整pH 值。


8.为什么液体培养基1640颜色发黄,是pH值不对吗?

不是。因为配方原因,1640为减酚红型,其中酚红的浓度只有DMEM的四分之一,所以是因为酚红浓度低,而非PH值低。


9.培养液pH是怎样影响细胞生长的?

由于大多数细胞适宜PH值为7.2-7.4,偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对PH值要求也不完全相同,原代细胞培养一般对PH值变动耐受差,无限细胞系耐受力强。

但总体来说,细胞耐酸性比耐碱性强一些,偏酸环境中更有利于细胞的生长。因此,配制培养用液时可把液体的PH值稍微调的偏酸一些。液体在经过0.1um或0.2um滤膜过滤时,PH值会向上浮动0.2左右。


10.培养液渗透压是怎样影响细胞生长的?

当细胞内、外环境的分子浓度不同时就会产生渗透压。这种情况下,水分通过渗透流入或流出细胞,从而改变细胞的内环境。

高渗透压迫使水分从细胞中扩散出来导致细胞收缩,这种情况会使DNA和蛋白遭到破坏,细胞周期停滞以及最终使细胞死亡;反之,低渗透压使水分流入细胞内,使细胞肿胀破裂。


11.为什么有客户要求培养基中不含酚红?

研究表明,酚红可以模拟固醇类激素的作用(特别是雌激素)。为避免固醇类反应,细胞培养,尤其是哺乳类细胞时,用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时,不使用加酚红的培养基。


12.酚红的作用是什么?

酚红在培养基中被用来作为PH值指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。


13.干粉培养基里含NaHCO3吗?

所有的干粉培养基中都不含NaHCO3 。

请依据说明书或包装袋上的标注,在干粉培养基完全溶解后添加NaHCO3 。


14.NaHCO3的作用是什么?

与CO2一起形成缓冲系统,保持培养基PH值稳定。


15.我们实验室培养箱CO2浓度一直以来都是5%,这样可以吗?

当然不可以,不同的培养基要求添加NaHCO3的量不一样,如DMEM要求添加3.7g/L,为了保持PH值稳定,必须用高浓度的CO2平衡,一般不低于8%,而1640等要求添加NaHCO3 2.2g/L,还有些培养基要求添加更少,那么这些培养基就要求较低的浓度平衡,一般是5%。


16.培养基中丙酮酸钠的作用是什么?

丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源,尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源,但是如果没有葡萄糖的话,细胞也可以代谢丙酮酸钠。

丙酮酸钠的贮存液浓度一般为50mM,-20℃保存,培养基中的终浓度为1mM.


17.谷氨酰胺的作用是什么?

几乎所有的细胞对谷氨酰胺都有较高的要求。谷氨酰胺脱掉氨基后,可作为培养细胞的能量来源,参与蛋白质的合成和能量代谢。在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡。所以,各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。

谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置-20℃冰冻保存,用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4度冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。


18.在培养基中加入HEPES有何好处?

培养基中最常用的Buffer system是碳酸氢盐,它可提供营养,但却在生理PH值条件下会降低缓冲能力。而HEPES是一种很强的Buffer,加入HEPES能使细胞培养基在PH7.2-7.6条件下缓冲能力增强。

Hepes的贮存液浓度一般为1M,常温保存。培养基中的终浓度为25mM,即5ml 1M的Hepes加入到200ml完全培养基中。


19.GlutaMAX-Ⅰ是什么?培养细胞如何利用GlutaMAX-Ⅰ?这个二肽有多稳定?

GlutaMAX-Ⅰ是一个L-谷氨酰胺的衍生物,其不稳定的a-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽,释放L-谷氨酰胺供利用。

GlutaMAX-Ⅰ二肽非常稳定,即使在121℃灭菌20min, GlutaMAX-Ⅰ二肽溶液有最小的降解;而在相同条件下,L-谷氨酰胺几乎完全降解。

L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的,但其在溶液中不稳定,经过一段时间后会降解,确切的降解率一直没有最终确定。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成,而氨对于一些细胞具有毒性。因此GlutaMAX-Ⅰ是细胞培养中谷氨酰胺的替代品。


20.可否使用与原先培养条件不同的培养基?

不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基,若骤然使用和原先提供之培养条件不同的培养基,细胞大多无法立即适应,造成细胞无法存活。









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