Thermo Scientific Phusion Plus DNA聚合酶

Phusion Plus DNA聚合酶：更高成功率，更简单设置，值得信赖的PCR酶             Thermo Scientific Phusion Plus DNA聚合酶是Phusion高保真DNA聚合酶家族的最新成员，该系列产品久负盛名，在成千上万篇文献中被引用。作为一个热启动，具有校正功能的PCR酶，Phusion Plus DNA聚合酶使得PCR扩增具有高序列准确性、灵敏性和特异性。此外，其专门配制的反应缓冲液使您无需计算引物退火温度即可进行PCR扩增，从而帮助节省时间并避免PCR运行中的错误。        最新上市的Phusion Plus DNA聚合酶是Phusion高保真DNA聚合酶家族的最新成员。和原Phusion产品一样，它是融合了一个DNA结合结构域的类热球菌高保真酶，但Phusion Plus DNA聚合酶在此基础上性能全面升级，帮助您获得更高的序列准确性、灵敏性和特异性。此外，其专门配制的反应缓冲液使您无需计算引物退火温度即可进行PCR扩增，从而帮助节省时间并避免PCR运行中的错误。

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产品特点：

•   高序列准确度 — >100×Taq 聚合酶高保真度

•   设置方便 — 对不同引物均使用60°C通用退火温度，无需计算Tm

•   更高的特异性和工作台稳定性 — 通过热启动修饰减少非特异性扩增和引物降解，配制好的反应体系可在室温下稳定24小时，适用于自动化和高通量应用

•   强劲扩增 — 高效扩增高GC含量序列和包含DNA抑制剂的模板；快速延伸速度15–30 sec/kb

•   更少的加样步骤 — 提供包含或不包含上样染料的预混液形式

Phusion Plus DNA聚合酶的支持数据

1、PCR序列的准确性

作为具有校正功能的超高保真度的聚合酶，使用Phusion Plus DNA聚合酶产生的扩增子错误率非常低，让您对PCR序列准确性充满信心。

图1. 不同品牌高保真酶相对于Taq DNA聚合酶的保真度。通过二代测序分子标签法确定错误率，随后均一化为相对于Taq DNA聚合酶的保真度倍数。

‍                   Technical note: Measuring fidelity of Phusion Plus DNA Polymerase

2、采用通用退火温度，设置简单方便

由于其反应缓冲液的独特配方，使用Phusion Plus DNA聚合酶无需通过退火温度（Tm）计算器来确定退火温度。无需考虑引物的Tm值，所有的靶标都可以使用60℃的通用退火温度来进行扩增。此外，如果您希望沿用原本的Phusion方案，这种酶也可以在计算的退火温度下使用。

               图2. 在两种退火温度条件下进行PCR扩增。从50ng人类基因组DNA（gDNA）中扩增12个不同退火温度（在每一列上方已标示）的靶标。采用60°C通用退火温度（左图）

               或使用Tm计算器计算的退火温度（右图）。分子量标准为Thermo Scientific ZipRuler Express Ladder DNA 2。

Phusion Plus DNA聚合酶的通用退火功能允许使用通用循环方案, 帮助您同时扩增不同长度的PCR靶标并节省时间。不同长度的靶标均使用同一退火温度（60°C）和基于最长扩增子的延伸时间——即在同一模块中同时扩增多个靶标，而不会影响PCR产量和特异性。

图3. 使用Phusion Plus DNA聚合酶可同时扩增多个PCR靶标。从人类基因组DNA中扩增5个不同长度的靶标，对所有靶标采用基于最长扩增子的延伸时间（最长7.5kb ，需3分45秒）的通用循环方案（左图）， 或针对不同靶标采用不同的延伸时间方案（0.3 kb 9秒，0.7 kb 21秒，2 kb 60秒，3.9 kb 2分钟，7.5 kb 3分45秒）进行扩增（右图）。分子量标准为ZipRuler Express DNA Ladder 2。

3、PCR扩增的产品和特异性

使用Phusion Plus DNA聚合酶可获得更高的PCR特异性和产量。 该酶采用亲体分子热启动修饰，有助于抑制在PCR体系配制时酶的活性，防止非特异性扩增和引物降解。

图4. 使用Phusion Plus DNA聚合酶的高产量和特异性。使用不同品牌的DNA聚合酶，按照厂家推荐方案从100 ng人类g

DNA中扩增 0.3-7.5 kb DNA靶标。分子量标准为Thermo Scientific GeneRuler 1 kb Plus DNA Ladder。

4、反应体系的工作台稳定性

Phusion Plus DNA聚合酶通过严格的热启动修饰技术抑制其在室温下的活性，可在室温下提供长达24小时的反应体系的稳定性，适用于高通量自动化或移液系统。

图5. Phusion Plus DNA聚合酶的工作台稳定性。使用不同品牌的热启动DNA聚合酶，

按照厂家推荐方案从50ng人类基因组DNA中扩增0.5kb靶标。 配制好的PCR反应体系

立即（0小时）放入PCR仪，或在室温放置24小时后再放PCR仪运行（24 hr）。分子量

标准为GeneRuler 1 kb Plus DNA Ladder。

5、靶标检测的灵敏性

Phusion Plus DNA聚合酶可以检测低至0.08 ng的人基因组DNA。

                              图6. Phusion Plus DNA聚合酶的高灵敏性。 使用不同品牌的DNA聚合酶， 按照厂商推荐的方案从不同含量的人类基因组DNA中扩增0.5kb的靶标。分子量标准为                                          GeneRuler 1 kb Plus DNA Ladder。

6、PCR抑制剂耐受力

由于其融合蛋白技术和独特的缓冲液配方，Phusion Plus DNA聚合酶对来自植物（如木聚糖）、土壤（如腐植酸）和血液（如血红素）的抑制剂表现出更高的耐受性。

                                                         图7. Phusion Plus DNA聚合酶的高抑制剂耐受力。使用不同的DNA聚合酶，按照厂商推荐方案从50 ng 人gDNA中

                                                         扩增2 kb靶标。反应组分包括：1-无抑制剂；2-腐植酸（0.5 μg/mL）；3-血红素（2.5 μM）；4-木聚糖（250 μg/mL）。

                                                         分子量标准为GeneRuler 1 kb Plus DNA Ladder。

7、扩增高GC含量序列

Phusion Plus DNA聚合酶包装中配有Phuson GC Enhancer，以更高效的扩增GC含量>65%的序列。

                               图8. 使用Phusion Plus DNA聚合酶高效扩增高GC含量模板。使用不同的DNA聚合酶，按照厂商推荐方案从50 ng 人类gDNA中扩增5个高GC含量

                              （含量如图示）的靶标（0.78 kb，0.74 kb，0.72 kb，0.66 kb和0.55 kb）。分子量标准为 ZipRuler Express Ladder DNA 2。

8、扩增子长度

Phusion Plus DNA聚合酶具有高持续合成能力，可扩增长片段DNA——最大10kb的人类gDNA和20 kb的lambda DNA。延伸速度为15-30 秒/kb, 扩增时间非常短。

                                                    图9. Phusion Plus DNA聚合酶的扩增范围。使用Phusion Plus DNA聚合酶成功扩增9.1 kb的人类gDNA靶标（左图）

                                                    和18kb的lambda DNA靶标（右图）。分子量标准为GeneRuler 1 kb Plus DNA Ladder。

Phusion Plus，Phusion和Phusion热启动II DNA聚合酶的比较：

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